title: I район (Старе-Място)

text: Жилой фонд дзельницы, представляющий историческую и культурную ценность, в основном принадлежит муниципалитету.


title: I район (Старе-Място)

text: Численность населения дзельницы составляет 37.166 человек (на 31 декабря 2007 года было 42.671).


title: I район (Старе-Място)

text: Памятники культуры Малопольского воеводства:


title: I район (Старе-Място)

text: Памятники истории Указом президента Леха Валенсы от 8 сентября 1994 года.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: Кагано́вичский район — административно-территориальная единица в составе Омской области РСФСР СССР, существовавшая в 1937—1953 годах.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: Районный центр — село Красноярка.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: Постановлением ВЦИК от 4 июля 1937 года был образован Кагановичский район из частей Омского горсовета. Назван в честь советского хозяйственника Наркома Наркомата(Министерства)Путей Сообщения Л. М. Кагановича.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: На 1 января 1938 года в районе насчитывался 21 сельский совет.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В 1938 году центр Новоатамановского сельского совета перенесён в посёлок Серебряковку. Центр Красногорского сельского совета перенесён в село Красногорку. Центр Коммунаровского сельского совета перенесён в село Классино.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В 1940 году из части Кагановичского района был выделен Ульяновский район с передачей Ачаирского, Каржасского, Красногорского, Мельничного, Новоатамановского, Ребровского, Сосновского, Троицкого, Усть-Заостровского, Черёмуховского сельских советов.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: На 1 января 1941 года в районе насчитывалось 11 сельских советов. Площадь района 3500 квадратных километров.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В январе 1941 года Богословский сельский совет передан в Ульяновский район.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В январе 1941 года установлена граница между сельскими советами, а также центр Сперановского сельского совета перенесён из села Новомосковки в село Андреевка.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: На 1 января 1947 года в районе насчитывалось 10 сельских советов. Площадь района 1800 квадратных километров.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В 1947 году центр района перенесён из города Омска в село Красноярка.


title: Кагановичский район (Омская область)

text: В 1953 году Кагановичский район был ликвидирован Хрущёвым. Территория присоединена к Ульяновскому району и городу Омску.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Анато́лий Ти́хонович Шавы́рин (1907—1997) — советский работник сельского хозяйства, Герой Социалистического Труда (1967), участник Великой Отечественной войны.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Родился в 1929 году с селе Рассыпное Медвеженского уезда Ставропольской губернии (ныне , Ростовская область). Во время Гражданской войны потерял отца и мать. В одиннадцать лет Анатолию пришлось наняться в батраки к кулаку Пономаренко. Сначала ухаживал за скотом, потом был помощником машиниста на молотилке.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: В 1929 году вместе с другими односельчанами вступил в ТОЗ. Потом — служил в армии, после службы окончил курсы трактористов.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Работал в совхозе «Гигант» трактористом. А после его разукрупнения в 1934 году — в зерносовхозе «Целинский». Более 40 лет проработал здесь Анатолий Тихонович.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: В начале шестидесятых Анатолий Тихонович Шавырин создал звено из молодых механизаторов по выращиванию сахарной свеклы и других кормов.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Правительство высоко оценило многолетний труд участника войны, тракториста-организатора, Анатолия Тихоновича Шавырина, присвоив ему звание Героя Социалистического Труда.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Нездоровье заставило его оставить штурвал «стального коня» и уехать на родину — в село Летник Песчанокопского района.


title: Шавырин, Анатолий Тихонович

text: Умер 5 декабря 1997 года.


title: Корниловский район

text: Корни́ловский район — административно-территориальная единица в составе Сибирского края РСФСР СССР, существовавшая в 1925—1929 годах.


title: Корниловский район

text: Районный центр — село Корниловка.


title: Корниловский район

text: Район был образован Постановлением ВЦИК от 25 мая 1925 года из Корниловской укрупнённой волости Омского уезда Омской губернии. Район вошёл в состав Омского округа Сибирского края.


title: Корниловский район

text: В начале 1925 года из Зотинского сельского совета выделен Георгиевский. Из Станционно-Богдановского и Корниловского сельских советов выделен Никитинский.


title: Корниловский район

text: В июле 1925 года из Самаринского сельского совета выделен Богдановский. Из Богословского, Латышского сельских советов образован Аксаковский. Из Дубровского и Павлодаровского сельских советов выделен Алексеевский. Из Дубровского сельского совета выделен Фёдоровский. Из Михайловского сельского совета выделен Ефимовский. Из Станционно-Богдановского сельского совета выделен Никитинский. Из Некрасовского сельского совета выделен Новороссийский. Из Некрасовского сельского совета выделен Новороссийский. Из Новосельского сельского совета выделен Сосновский. Из Сперановского сельского совета выделены Пушкинский и Ростовкинский.


title: Корниловский район

text: В декабре 1925 года из частей Корниловского и Никитинского сельских советов образован Александровский. Георгиевский сельский совет присоединён к Зотинскому. Из Самаринского сельского совета выделен Игнатьевский.


title: Корниловский район

text: В 1925 году в районе насчитывалось 67 населённых пунктов, 29 сельских советов, 5850 хозяйств.


title: Корниловский район

text: В апреле 1926 года образован Михеевский сельский совет.


title: Корниловский район

text: В июле 1926 года из Михайловского сельского совета выделен Фоминовский.


title: Корниловский район

text: В сентябре 1926 года Фёдоровский сельский совет вошёл в Михеевский.


title: Корниловский район

text: В 1926 году в районе насчитывалось 6188 хозяйств, 81 населённый пункт, 32 сельских совета.


title: Корниловский район

text: В 1928 году Царско-Колодцевский сельский совет переименован в Черниговский, центр село Царские Колодцы переименовано в Черниговское.


title: Корниловский район

text: В 1929 году район был упразднён. Территория вошла в Иконниковский и Омский районы.На 1925 год по похозяйственным книгам в районе насчитывалось 30358 человек.


title: Корниловский район

text: По переписи населения 1926 года в районе проживало 33268 человек в сельской местности (16330 м — 16938 ж). Крупные национальности: русские, украинцы, поляки, латыши, немцы.


title: Корниловский район

text: Крупнейшие населённые пункты:


title: Крестинский район

text: Кре́стинский район — административно-территориальная единица в составе Сибирского края РСФСР СССР, существовавшая в 1925—1929 годах.


title: Крестинский район

text: Районный центр — село Андреевка.


title: Крестинский район

text: Район образован Постановлением ВЦИК от 25 мая 1925 года из Крестинской укрупнённой волости Калачинского уезда Омской губернии. Район вошёл в состав Омского округа Сибирского края.


title: Крестинский район

text: В 1925 году из Батпакульского сельского совета выделен Кулановский. Из Власовского, Любимовского, Мариновского сельских советов выделен Кирилловский. Из Стретенского сельского совета выделен Ивановский. Из Орловского сельского совета выделен Любимовский. Из Михайловского сельского совета выделен Погранично-Григорьевский. Из Преображенского сельского совета выделен Ольговский. Из Стекляннского сельского совета выделен Репинский.


title: Крестинский район

text: В 1925 году в районе насчитывалось 67 населённых пунктов, 29 сельских советов, 5513 хозяйств.


title: Крестинский район

text: В апреле 1926 года часть населённых пунктов передано в другие сельские советы.


title: Крестинский район

text: В 1926 году в районе насчитывалось 5647 хозяйств, 29 сельских советов, 76 населённых пунктов.


title: Крестинский район

text: В 1929 году район был упразднён. Территория отошла в Калачинский и Черлакский районы.В 1925 году по похозяйственным книгам в районе насчитывался 27331 человек.


title: Крестинский район

text: По переписи населения 1926 года в районе проживало 28643 человека в сельской местности (13964 м — 14689 ж). Крупные национальности: русские, украинцы, белорусы, эстонцы, немцы, чехи, киргизы.


title: Крестинский район

text: Крупнейшие населённые пункты:


title: Морено, Ролан

text: Ролан Морено (), изобретатель смарт-карты (smart card) — электронной карточки памяти, которая используется в кредитных картах и в SIM-картах мобильных телефонов.


title: Морено, Ролан

text: Морено родился в семье египетских евреев года в Каире, Египет. Его фамилия была изначально Bahbout, но семья сменила фамилию на Moreno после переезда во Францию.


title: Морено, Ролан

text: В 15 лет Ролан приехал учиться в Париж. Работал клерком в офисе, потом подался в репортеры в детективном журнале Détective Magazine и одновременно курьером в L’Express news magazine, а к 1970 году стал редактором новостей в химическом издании Chimie-Actualités.


title: Морено, Ролан

text: Ролана влекло создание новых идей — то, что сейчас называют «интеллектуальной собственностью». Он разработал первую компьютерную программу, которая составляла названия для брендов и фирм, соединяя выбранные словарные единицы. Эта идея позднее была лицензирована компанией Nomen.


title: Морено, Ролан

text: Идея смарт-карты памяти была запатентована Морено 25 марта 1974. Изначально идея была сделать смарт-карту, заключив её в перстень для ношения на руке.


title: Морено, Ролан

text: К началу 1975 года была сделана пластиковая карточка, а через год он продемонстрировал электронную оплату по кредитке. Морено любил фильмы Вуди Аллена, поэтому свой проект он назвал по его фильму Take the money and run («Хватай деньги и беги»), сокращенно — TMR. Позднее он переставил буквы на RMT — Ronald Moreno Technology.


title: Морено, Ролан

text:
Смарт карта появилась на свет под французским названием «la carte à puce», но французские маркетологи оказались нерасторопными и человечество получило это чудо в англоязычном варианте. Карточки стала использовать система французской платной телефонной связи, но дело двигалось медленно. Технология была достаточно дорогой, кроме того, не все верили в её надежность.
История Смарт-карты неотделима от имени французского программиста Сержа Умпиша. В 2000 году он показал, что можно создать фальшивые банковские карты, которые действуют всюду: знаменитые «YesCards». Компания по выпуску банковских карт назвал его злоумышленником. Что касается, Морено, он со своей стороны заявил, что безопасность Смарт-карты является невредимой, и предложил миллион франков любому, кто взломает код его устройства. До сегодняшнего дня, его взломать никому не удалось.


title: Морено, Ролан

text: Постепенно до банков и транспортных систем дошла возможность отслеживать пользования карточкой не только по времени, но также и в пространстве, методом триангуляции по мачтам мобильной связи. American Express представил первую платежную смарт-карту Blue Card только в 1999 году.


title: Морено, Ролан

text: Успех внедрения смарт карт принес Морено деньги: его компания Innovatron заработала более €150 миллионов в виде лицензионных отчислений от использования смарт-карт.


title: Морено, Ролан

text: Морено мечтал быть увековеченным, но не в бронзе, а в воске, как в музее мадам Тюссо. «Бог многим обязан Иоганну Себастьяну Баху, — сказал Морено однажды, — я хотел бы, чтобы люди помнили, чем Франция обязана мне».


title: Морено, Ролан

text: О своем изобретении смарт-карты Ролан Морено сказал в 2005 году: «Я могу остановить любого прохожего на улице Парижа и у него в кармане будут как минимум три образца моего изобретения».


title: Морено, Ролан

text: За свои изобретения Морено был признан национальным героем Франции и награждён званием офицера Почетного Легиона в 2009.


title: Морено, Ролан

text: Морено придумал три музыкальных устройства — пьезоматик, пианок и калькулетт, создал радиостанцию Делиро (ныне бездействующую), веб-сайт с викторинами и сайт для игры в покер.


title: Морено, Ролан

text: Ролан Морено известен и как автор книг: «Эврика» (Eurêka,1988), «Чип — тайная история» (Carte à puce, l’histoire secrète, 2002), «Башотрон» (Bachotron, 2002), «Селимена» (Célimène, 2003).


title: Морено, Ролан

text: Ролан Морено скончался в Париже в возрасте 66 лет.


title: Кидо, Ибуки

text: — японская сэйю и певица. Работает в агентстве Horipro. Состоит в сейю-юните everying! вместе с сейю Эри Ямадзаки.


title: Кидо, Ибуки

text: Поклоница сейю и певицы Наны Мидзуки.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: Уральский район — административно-территориальная единица в составе Сибирского края РСФСР СССР, существовавшая в 1925—1929 годах.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: Районный центр — село Ново-Уральское.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: Район образован Постановлением ВЦИК от 25 мая 1925 года из Уральской укрупнённой волости Калачинского уезда Омской губернии. Район вошёл в состав Омского округа Сибирского края.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: На расширенном пленуме Новоуральского райисполкома № 37 от 24 июля 1925 года был принят проект разукрупнения сельсоветов Новоуральского района.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В декабре 1925 года из Бреславского сельского совета выделен Ямпольский. Из Ракитинского сельского совета выделен Голубинский. Из Славянского и Баландинского сельских советов выделен Патровский.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В 1925 году в районе насчитывалось 136 населённых пунктов, 19 сельских советов, 3213 хозяйств.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: На 1926 год в районе насчитывалось 3446 хозяйств, 15 сельских советов, 133 населённых пункта.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В январе 1927 года Царскодарский сельский совет переименован в Краснодарский, центр переименован в село Краснодарское.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В апреле 1927 года участки Бакинский, Агафинский, Красносельский, Новобазарный переданы в Новоуральский сельский совет.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В декабре 1927 года из Аулсовета № 4 был выделен Аулсовет № 7.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: В 1929 году район был упразднён:В 1925 году по похозяйственным книгам в районе насчитывалось 16298 человек.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: По переписи населения 1926 года в районе проживало 18360 человек в сельской местности (9341 м — 9019 ж). Крупные национальности: русские, украинцы, киргизы, казаки, немцы, мордва.


title: Уральский район (Сибирский край)

text: Крупнейшие населённые пункты:


title: USS Florida (BB-30)

text: Линейный корабль «Флорида» () — линкор, головной корабль типа «Флорида» флота США. ВВ-30 «Флорида» — пятый дредноут флота США.


title: USS Florida (BB-30)

text: Линкор «Флорида» был заложен в Нью-Йорке на верфи «Нью-Йорк Нэйви Ярд» в марте 1909 года. Был головным кораблем типа типа «Флорида» по конструкции почти полностью повторял линкоры типа «Делавэр». Спущен на воду в мае 1910 г. после чего достраивался на плаву. «Флорида» была введена в состав флота в сентябре 1911 года.


title: USS Florida (BB-30)

text:
После проведения испытаний проходил боевую подготовку в Карибском море.
Вошёл в состав Атлантического Флота США 29 марта 1912 как флагман 1-й дивизии линкоров. Первым командиром нового линкора был назначен кэптен К. С. Кнапп. До начала Первой мировой войны участвовал в многочисленных манёврах флота и боевой подготовке у Восточного побережья США.
Участвовал в военных действиях в Мексике в 1913—1914 гг, обеспечивая высадку американских оккупационных войск в Веракрусе


title: USS Florida (BB-30)

text:
Начавшаяся в Европе Мировая война, мало отразилась на повседневной службе линкора.
В октябре 1914 году линкор «Флорида» был включен во 2-ю дивизию линейных кораблей.
В 1916 году проходил боевую подготовку в Чесапикском заливе.
6 апреля 1917 года США объявили войну Германии, прологом к которой стала начатая немцами неограниченная подводная война. ВМС США сформировали 9-ю дивизию линейных кораблей, в которую вошли «Флорида», «Нью-Йорк», «Вайоминг», «Делавэр».


title: USS Florida (BB-30)

text: 25 ноября 1917 года линкор «Флорида» в составе 9-й дивизии был отправлен через Атлантический океан в Европу. 7 декабря 1917 года прибыл на Оркнейские острова и соединился с британским Гранд Флитом. После прибытия в Скапа флоу, Линкоры 9-й дивизии стали 6-й Эскадрой Гранд Флита. Эскадра базировалась на английской военно-морской базе в Скапа-Флоу. Задача линкоров сводилась к боевому патрулированию в Северном море и сопровождению конвоев союзников в Норвегию.


title: USS Florida (BB-30)

text:
22-24 апреля стало известно о выходе немецкой эскадры «Флота открытого моря» для перехвата конвоя союзников. 24 апреля 1918 года «Флорида» и остальные линкоры «Гранд Флита» вышли из Скапа флоу на перехват немецких линкоров, но те уже направлялись в базы. «Флорида» огневого контакта с немецкими линкорами не имел.
20 ноября 1918 участвовал в эскортировании германского Флота Открытого Моря во время его интернирования.
12 декабря 1918 года линкор сопровождал пароход «Джордж Вашингтон» который вез президента Вудро Вильсона в Европу для участия в мирных переговорах. Корабли прибыли в Брест, Франция, 13 декабря.
После заключения перемирия с Германией «Флорида» был заменен вступившим в строй линкором «Невада», после чего корабль вернулся в Соединенные Штаты.


title: USS Florida (BB-30)

text:
В январе 1919 года корабль прибыл на военно-морскую базу ВМС США «Норфолк».
В мае 1919 г линкор отправился к Азорским островам для наблюдений за погодой в интересах военно-морского флота.
В декабре 1920 года линкор совершил турне по Южной Америке с Государственным секретарем Бейнбриджем Колби на борту.
В августе 1920 года присутствовал в Массачусетсе на праздновании 300-летия высадки переселенцев-колонистов в Северной Америке.
В течение следующих трёх лет линкор участвовал в боевой подготовке и учебных походах, был флагманским кораблем флота.
Участвовал в учениях морской пехоты которая отрабатывала тактику амфибийных операций.
По результатам Вашингтонского морского договора 1922 года, линкор «Флорида» был оставлен в строю.


title: USS Florida (BB-30)

text:
В начале 1924 года, Флорида и Юта приняли участие в манёврах флота, где выступали в качестве дублёров для новых линкоров класса Колорадо.
После зимних манёвров 1924 года принято решение провести модернизацию энергетической установки линкора.
В июне 1924 года линкор, был выведен из эксплуатации для модернизации в Бостоне.


title: USS Florida (BB-30)

text: Основным ресурсом для модернизации стали огромные запасы материалов, оборудования и механизмов, накопленные для так и не реализованной грандиозной программы 1916 года по наращиванию линейного флота США, которая после подписания Вашингтонского морского соглашения 1922 года была отменена.


title: USS Florida (BB-30)

text: С 1 апреля 1925 по 1 ноября 1926 года линкор «Флорида» в числе других американских линкоров прошёл капитальный ремонт и модернизацию. Главным направлением модернизации стала заменена котлов и перевод линкоров на жидкое топливо. При модернизации были значительно улучшены тактико-технические и эксплуатационные характеристики «Флорида». В ходе реконструкции была усиленна броня палубы, наварены бортовые були, усилена горизонтальная защита. Задние решетчатые мачты были заменены на одну, которая была сдвинулись к корме. Были демонтированы четыре 5-дюймовые пушек и два подводных торпедных аппарата.


title: USS Florida (BB-30)

text:
Вступив в строй после модернизации обновлённый корабль служил у Восточного побережья США. Проводил боевую подготовку в составе Атлантического флота, совершал учебный походы.
В июне 1928 года линкор принял учение в совместных учениях армии, военно-морских и сил береговой обороны.


title: USS Florida (BB-30)

text: Согласно подписанному Лондонскому морскому соглашению 1930 года, линкор «Флорида» был выведен из состава действующего флота на Филадельфийской военно-морской базе и списан 16 февраля 1931 г. 30 сентября 1932 г линкор был разобран на металл. Корабельный колокол был спасен и передан в «Университет Флориды», где он был установлен на вновь построенном стадионе. В 2003 году колокол корабля перенесен со стадиона в музей.


title: Солдатский район

text: Солда́тский район — административно-территориальная единица в составе Омской области РСФСР СССР, существовавшая в 1940—1953 годах.


title: Солдатский район

text: Районный центр — село Старо-Солдатское.


title: Солдатский район

text: В 1940 году образован Солдатский район из частей Колосовского и Тюкалинского районов.


title: Солдатский район

text: На 1 января 1941 года в районе насчитывалось 14 сельских советов. Ближайшая железнодорожная станция Называевская в 140 километрах. Расстояние до областного центра 294 километра. Площадь района 3500 квадратных километров.


title: Солдатский район

text: На 1 января 1947 года в районе насчитывалось 14 сельских советов. Ближайшая железнодорожная станция Называевская в 140 километрах. Расстояние до областного центра 294 километра. Площадь района 3500 квадратных километров.


title: Солдатский район

text: В июне 1953 года центр Кошкульского сельского совета перенесён из села Кошкуль на центральную усадьбу совхоза «Кошкульский».


title: Солдатский район

text: В октябре 1953 года Солдатский район был ликвидирован. Территория вошла в Тюкалинский район.


title: Ковылёвые (триба)

text: Ковылевые () — триба однодольных растений подсемейства , распространённых по всему миру.


title: Ковылёвые (триба)

text: Триба включает в себя 22 рода, в которые входят около 600 видов.


title: Ковылёвые (триба)

text: Многие роды трибы ранее включались в род Ковыль, но затем с помощью филогенетического анализа были выделены в самостоятельные таксоны.


title: Ковылёвые (триба)

text: По данным "NCBI" триба включает в себе следующие роды:


title: Духанин

text: Духанин — фамилия:


title: Флуоресценция в биологических исследованиях

text: Флуоресценция нашла широкое применение в различных прикладных биологических и биомедицинских исследованиях. Это физическое явление, суть которого заключается в кратковременном поглощении кванта света флюорофором (веществом, способным флуоресцировать) с последующей быстрой эмиссией другого кванта, который имеет свойства, отличные от исходного. Много направлений в биофизике, молекулярной и клеточной биологии возникли и развиваются именно благодаря внедрению новых методов, базирующихся на флуоресценции. Стоит отметить несколько примеров.


text: Для биофизиков флуоресценция стала быстрым и чувствительным методом исследования структуры, динамики и функций биологических макромолекул — нуклеиновых кислот и белков.


text: Метод секвенирования ДНК благодаря работам Сэнгера был значительно усовершенствован во второй половине 1980-х годов именно благодаря внедрению флуоресцентной детекции. Важным следствием этого стала высокая скорость и надёжность секвенирования. Кроме того, метод был автоматизирован. Это открыло техническую возможность проведения широкомасштабного (по масштабам того времени) секвенирования и позволило начать проект «Геном человека» в начале 1990-х годов. Хотя секвенирование по Сэнгеру почти полностью вышло из использования, флуоресценция продолжает использоваться в методах секвенирования ДНК следующих поколений.


text: Флуоресценция дала новый толчок развитию клеточной биологии. Благодаря конфокальной флуоресцентной микроскопии и разработке новых флуоресцентных меток на базе зелёного флуоресцентного белка (ЗФБ) и его аналогов появилась возможность получать специфически контрастную окраску и делать фотоснимки с высоким разрешением многих внутриклеточных белковых структур. Разработка новых флуоресцентных зондов — веществ, изменяющих флуоресценцию, когда к ним присоединяется определённая молекула — дала возможность детально исследовать химический состав живых клеток и даже организмов, а также его изменение во времени и пространстве, что положило начало флуоресцентному молекулярному имиджингу ()


text:
Флуоресценция — это одно из явлений, которые могут происходить во время взаимодействия электромагнитного излучения с веществом.
При нормальных условиях подавляющее большинство молекул находится в основном электронном состоянии. Молекулы могут поглощать кванты электромагнитного излучения определённой энергии и переходить в возбуждённое состояние. Это соответствует переходу одного электрона с высшей занятой на самую низкую свободную молекулярную орбиталь. Согласно их мультиплетности, основное и возбуждённое электронные состояния обозначают formula_1 и formula_2. Возбуждение большинства флюорофоров (formula_3) происходит под действием коротковолнового ультрафиолетового (длина волны 300—400 нм) или видимого (длина волны 400—800 нм) света. После перехода флюорофора в возбуждённое состояние происходит релаксация — процесс, при котором молекула теряет часть энергии; при этом она опускается до самого низкого колебательного подуровня электронного уровня formula_2. В жидкой среде при нормальных условиях этот процесс происходит за время порядка нескольких пикосекунд (10 с). Согласно правилу Каши именно с самого низкого колебательного подуровня электронного уровня formula_2 происходит переход в основное электронное состояние, что сопровождается флуоресценцией. Из-за потери энергии во время релаксации и по некоторым другим причинам флуоресцентное излучение имеет меньшую энергию (и соответственно большую длину волны) по сравнению со светом, который поглощается во время возбуждения.


text: На рисунке, приведённом выше, не показаны другие процессы, которые конкурируют с флуоресценцией. В частности, за время существования молекулы в возбуждённом состоянии может состояться внутренняя конверсия, то есть безызлучательный переход formula_6. Существует также возможность перехода молекулы в триплетное состояние formula_7 за счёт интеркомбинационной конверсии. Полную картину возможных переходов можно увидеть на диаграмме Яблонского. Флуоресценцию не следует путать с другими типами люминесценции, такими как фосфоресценция, хемолюминесценция, биолюминесценция т. п.


text: В простейшем случае для наблюдения флюоресценции нужны только раствор флуоресцентного соединения и соответствующий источник света для возбуждения. Удобным источником возбуждения являются ручные ультрафиолетовые лампы.


text:
Основными приборами для изучения флуоресценции в лабораторных условиях являются спектрофлуориметры. Сильно упрощённая схема такого прибора показана на рисунке.
В спектрофлуориметрах используют различные источники света, чаще всего ксеноновые лампы высокого давления. Они дают широкий спектр эмиссии (от ультрафиолетового до инфракрасного света). Излучение от лампы поступает к монохроматору возбуждения, который даёт на выходе свет с определённой нужной длиной волны formula_8. После этого монохроматический луч направляется на образец, вызывая его флуоресценцию. Важным является то, что флуоресцентная эмиссия изотропна, то есть её интенсивность одинакова во всех направлениях (не зависит от угла, под которым она наблюдается). Это даёт возможность легко отделить её от возбуждающего света. Расположение детектора под углом 90° к направлению возбуждения даёт возможность улавливать исключительно те фотоны, которые являются результатом флуоресцентной эмиссии. Флуоресцентный свет пропускается сквозь ещё один монохроматор (монохроматор эмиссии, formula_9). После этого интенсивность светового потока измеряется с помощью детектора.


text: Перечисленные здесь компоненты (источник света, монохроматоры, детектор) в различных вариантах и комбинациях присутствуют во всех приборах, измеряющих флуоресценцию. В зависимости от назначения прибора, конфигурация и характеристики каждого из элементов системы могут варьироваться. Например, вместо монохроматоров могут использоваться наборы светофильтров; в качестве источников монохроматического света могут использоваться лазеры.


text: Существует ряд количественных параметров, описывающих флуоресцентное излучение.


text: В исследованиях биологических систем полезными являются некоторые явления, связанные с флуоресценцией.


text: По своей чувствительности флуоресценция является абсолютным рекордсменом, превосходя методы детекции, базирующиеся на поглощении света или использовании радиоактивного распада. Современные инструменты могут идентифицировать отдельные флуоресцентные молекулы. Это способствовало развитию отдельного направления — одномолекулярной флуоресцентной спектроскопии (ОФС, ). Одномолекулярная флуоресцентная спектроскопия открыла новые возможности для изучения биологических систем на молекулярном уровне. Например, классические методы исследования биомолекул, такие как спектроскопия ядерного магнитного резонанса, имеют дело с большими образцами, содержащими большое количество молекул, поэтому всё время приходится иметь дело с усреднённым сигналом. Другие методы, такие как электронная микроскопия, позволяют физически наблюдать за отдельными молекулами; однако такие методы не дают возможность изучать их в биологически-релевантных условиях. Одномолекулярная флуоресцентная спектроскопия стала важным методом исследования, сочетающим возможность наблюдать за отдельными молекулами с возможностью исследовать их в динамике и при биологически-релевантных условиях. Например, именно благодаря ОФС стало возможным изучать сворачивание и динамику белков и ДНК на уровне отдельных молекул. Также на основе ОФС были созданы методы для секвенирования отдельных молекул ДНК и для наблюдения за отдельными флуоресцентными молекулами в клетке с использованием флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения. С помощью современных методов одномолекулярной микроскопии удаётся не только определить положение отдельных молекул в клетке с точностью до нескольких десятков нанометров (что значительно превосходит возможности традиционной световой микроскопии), но и следить за их преобразованиями в реальном времени.


text: Существует большое количество флюорофоров, каждый из которых характеризуется определённым максимумом эмиссии (цветом флуоресценции). Это открывает возможность для мультиплексной детекции, то есть для наблюдения за несколькими объектами одновременно, если они закодированы флюорофорами с разными цветами эмиссии. Спектры эмиссии флюорофоров должны при этом не перекрываться. Если использовать флюорофоры с узкими спектрами, такие как квантовые точки, возможно наблюдать даже за пятью внутриклеточными целями одновременно.


text: Существует возможность проводить исследования с использованием флуоресценции на живых клетках и даже целых организмах. Видимый флуоресцентный свет не поглощается биологическими макромолекулами, водой и другими компонентами живых клеток и не влияет на процессы, происходящие в клетке.


text: За последние годы были разработаны многочисленные биосовместимые флюорофоры и флуоресцентные зонды. Среди них особенно выделяются флуоресцентные белки. Благодаря генной инженерии флуоресцентные белковые маркеры разных цветов могут быть присоединены к протеинам у различных лабораторных организмов (). На фотографии справа изображены мыши, в геном которых был встроен ген eGFP — усиленного зелёного флуоресцентного белка.


text: При визуализации флуоресценции в живых тканях определённую проблему составляет поглощение света с короткими длинами волн. В связи с этим широкую популярность в качестве лабораторного организма получила Данио-рерио — маленькая аквариумная рыбка, которая является полностью прозрачной для видимого света на первых этапах развития. Это делает её удобным модельным организмом для исследований с использованием флуоресцентных меток и зондов.


text: Флуоресценция является очень быстрым процессом, который происходит в наносекундной шкале времени (в случае отдельных комплексов металлов — в микросекундной). За секунду одна молекула флюорофора может излучить миллионы фотонов, каждый из которых содержит информацию об окружении, в котором находилась молекула непосредственно перед эмиссией. Благодаря этому флуоресценцию удобно использовать для исследования быстрых процессов, таких как сворачивание и динамика отдельных белковых молекул.


text: Пространственное разрешение метода указывает, на каком минимальном расстоянии должны находиться объекты для того, чтобы их можно было однозначно различить. Пространственное разрешение очень важно в исследованиях живых систем на микроскопическом уровне. Линейный размер отдельных клеточных структур, таких как, например, ядерные поры, может составлять десятки нанометров, что делает их недосягаемыми для классической оптической микроскопии.


text: Благодаря некоторым особенностям процесса флуоресценции, таким как, например, возможности управляемо избавляться от нежелательной эмиссии на определённых участках образца с помощью дополнительного облучения (,) в конце XX века были разработаны методы оптической микроскопии сверхвысокого разрешения ().


text: Если для конфокальной флуоресцентной микроскопии максимально достижимое пространственное разрешение составляет около 200 нм, для методов микроскопии сверхвысокого разрешения (STED, PALM и т. д.) разрешающая способность достигает нескольких десятков нанометров.


text: Способностью флуоресценции обладают далеко не все химические соединения. Например, из двадцати протеиногенных аминокислот флуоресцентными свойствами обладают всего три: фенилаланин, тирозин, и триптофан. Флуоресценция последнего широко используется для изучения конформаций, динамики и взаимодействий триптофансодержащих белков. Пуриновые и пиримидиновые азотистые основания, входящие в состав ДНК и РНК, почти не флуоресцируют при нормальных условиях.


text: Существует большое разнообразие искусственных флуоресцентных соединений с различными фотофизическими свойствами. Основными классами являются малые органические красители, координационные соединения лантаноидов, флуоресцентные белки и полупроводниковые нанокристаллы. Каждый класс имеет свои специфические особенности, преимущества и недостатки.


text: Малые органические флюорофоры являются крупнейшим классом флуоресцентных соединений. В большинстве случаев это относительно небольшие органические вещества, содержащие несколько ароматических фрагментов. Молекулярная масса большинства органических флюорофоров меньше одного килодальтона.


text: Флуоресцентными свойствами обладает чрезвычайно большое количество органических соединений. Практическое значение имеет только ограниченное их количество, — производные нескольких базовых структур. Это производные кумарина, флуоресцеина, родамина, борфторидных комплексов дипирролилметена BODIPY, цианиновые и сквариновые красители.


text: Цвет флуоресценции малых органических красителей может варьироваться в очень широких пределах. Так, например, производные кумарина и флуоресцеина имеют синюю и зелёную флуоресценцию соответственно. Производные родамина и BODIPY могут иметь жёлто-красную флуоресценцию, тогда как на базе цианинов и скваринов созданы красители, которые флуоресцируют в красном и ближнем инфракрасном цвете. Флуоресценцией красителя можно управлять, изменяя природу функциональных групп, присоединённые к флюорофору.


text: Другой особенностью малых органических флюорофоров является то, что их флуоресценцию можно «включать» с помощью минимальных изменений в химической структуре. Это широко используется в создании флуоресцентных зондов на основе таких молекул. Примером является флуоресцеин, который может существовать в форме двух таутомеров: в нефлуоресцентной лактонной форме и флуоресцентной открытой форме.


text: Нефлуоресцентные соединения на основе «закрытой» формы способны превращаться во флуоресцентные под действием определённых химических веществ.


text: Существуют химические методы для выключения и включения флуоресценции других флюорофоров. Подобные реагенты, которые увеличивают флуоресценцию в определённых условиях, называют «флуорогенными зондами».


text: Значительным преимуществом органических флюорофоров является возможность менять их фотофизические свойства с помощью варьирования функциональных групп. Другими преимуществами являются малый размер и возможность селективного ковалентного мечения биомолекул. Недостатками являются умеренные квантовые выходы флуоресценции, низкая яркость, низкая химическая стабильность и быстрое фотообесцвечивание под действием лазерного излучения.


text: Недавно разработаны новые поколения флуоресцентных красителей с улучшенными свойствами. В исследованиях новых флюорофоров используются современные методы органической химии, такие как комбинаторный органический синтез.


text: Флуоресцентные свойства присущи некоторым катионам металлов из группы лантаноидов (Ln). За поглощение и излучение света этими атомами отвечают переходы электронов f-подуровня, которые в большинстве случаев являются квантовомеханически запрещёнными. Поэтому флуоресценция лантаноидов имеет определённые особенности, в частности очень длинные времена жизни возбуждённого состояния, которые на 3-4 порядка выше, чем времена жизни органических флюорофоров. Из-за наличия нескольких возможных электронных переходов с разными энергиями, в спектрах флуоресценции лантаноидов наблюдается набор отдельных полос, характерных для каждого элемента. Цвет эмиссии может варьироваться от голубого (Tm) до инфракрасного (Er). Обычно лантаноиды используют в форме комплексов с органическими лигандами, которые повышают эффективность возбуждения атомов металла (сенсибилизация).


text: Важной группой флюорофоров являются флуоресцентные белки. Первый представитель этого класса — зелёный флуоресцентный белок (ЗФБ) — был выделен из медузы Aequorea victoria в 1962 году. Это относительно небольшой белок с молекулярной массой 27 кДа, который поглощает синий свет и флуоресцирует зелёный.


text: В 1996-м году трёхмерная строение дикого ЗФБ и его мутантов было исследовано методом дифракции рентгеновских лучей. Было выяснено, что белок имеет структуру, подобную цилиндру, который образован несколькими бета-листами. В центре цилиндра расположен флюорофор, который образуется благодаря химической реакции между аминокислотными остатками серина, тирозина и глицина (аминокислоты 65-67).


text: Исследования показали, что сворачивание полипептидной цепи ЗФБ в цилиндрическую структуру и образование функционального флюорофора является спонтанным процессом и не требует никаких посттрансляционных модификаций или кофакторов, кроме молекулярного кислорода. Как следствие, благодаря методам генной инженерии ЗФБ можно успешно экспрессировать во многих организмах, которые в естественном состоянии не имеют флуоресцентных белков.


text: Также была разработана технология использования ЗФБ в качестве маркерного протеина, который можно присоединить к другому внутриклеточному белку. Если совместить ген ЗФБ с геном, кодирующим определённый белок, после транскрипции и трансляции образуется новый гибридный протеин, состоящий из двух частей. При этом ЗФБ-часть самостоятельно превратится в компактную цилиндрическую структуру с флюорофором внутри. Поскольку ЗФБ является относительно небольшим биохимически инертным белком, он с высокой вероятностью не будет мешать своему «партнёру» выполнять свои функции в клетке. Но при этом вся гибридная конструкция будет ярко флуоресцировать, что даст возможность наблюдать за её возникновением и перемещениями. Например, если ввести ген ЗФБ в гены, кодирующие белки цитоскелета, последний станет ярко флуоресцировать.


text: Заменой отдельных аминокислот в диком ЗФБ методом мутагенеза были получены флуоресцентные белки с улучшенными свойствами. Например, изменение отдельных аминокислот из окружения флюорофора дало мутанты с другими цветами флуоресценции (синим, жёлтым, красным и инфракрасным). Также удалось получить варианты ЗФБ с меньшим временем образования флуоресцентной формы (созреванием), с более высокими фотостойкостью и квантовыми выходами флуоресценции.


text: Разработаны фотоактивационные флуоресцентные белки (), которые можно «включать» и «выключать» облучением светом определённого цвета.


text: На базе флуоресцентных белков были разработаны генетически программируемые флуоресцентные сенсоры. Кроме того, флуоресцентные белки нашли широкое применение во флуоресцентной спектроскопии сверхвысокого разрешения.


text: Революционное влияние флуоресцентных белков на современную биологию и биотехнологию было отмечено Нобелевской премией по химии 2008 года, которая была вручена Осаму Симомуре, Мартину Чалфи и Роджеру Тсиену.


text: Другой группой флуоресцентных соединений являются полупроводниковые нанокристаллы, или квантовые точки. При уменьшении физических размеров частиц полупроводника до нанометровых они начинают проявлять свойства, отличные от объёмных полупроводников. В частности, речь идёт о квантовых эффектах. При взаимодействии квантовой точки с электромагнитным излучением образуется экситон, который заперт в потенциальной яме. Рекомбинация экситона приводит к высвобождению энергии. Благодаря этому частицы нанометровых размеров, образованные из таких полупроводниковых веществ, как селенид кадмия (CdSe), способны поглощать свет и флуоресцировать.


text: Из-за различия в химическом строении и природе основного и возбуждённого электронного состояния, фотофизические свойства квантовых точек отличаются от свойств органических флюорофоров и флуоресцентных белков. Во-первых, квантовые точки дают узкий и симметричный спектр эмиссии, положение максимума которого зависит от диаметра квантовой точки и материала, из которого она образована. Если варьировать концентрацию реагентов при синтезе, можно добиться формирования квантовых точек преимущественно одного диаметра, которые будут иметь свой специфический цвет флуоресценции. Так, например, для CdSe изменение размера ядра от 13 до 24 нанометров приводит к изменению флуоресценции от голубой (λ = 500 нм) до красной (λ = 610 нм). Важным является то, что вид спектра возбуждения флуоресценции не зависит от диаметра; это означает, что можно добиться одновременного возбуждения различных типов квантовых точек, используя лишь одну волну возбуждения, что очень удобно для использования во флуоресцентной микроскопии.


text: Другими преимуществами квантовых точек над органическими флуоресцентными красителями являются высокие квантовые выходы флуоресценции и высокая устойчивость к фотообесцвечиванию.


text: В то же время квантовые точки имеют и ряд недостатков. Во-первых, это большие физические размеры, превышающие величину большинства биологических молекул. Во-вторых, материалы, из которых изготавливаются квантовые точки (Cd, Pb, Se, Hg), очень токсичны для живых клеток и организмов. Для уменьшения токсичности применяется многоступенчатый дизайн квантовых точек. Полупроводниковое ядро () покрывается двойной защитной оболочкой из родственного материала (для селенида кадмия таким материалом является сульфид цинка) и гидрофильной полимерной оболочкой, которая увеличивает растворимость квантовой точки в водной среде и даёт возможность химически привязывать к поверхности другие молекулы.


text: Квантовые точки широко используются во флуоресцентной микроскопии и молекулярной диагностике "in vitro"; также разрабатываются методы для использования их в молекулярном имиджинге и диагностике "in vivo".


text: Кроме квантовых точек, существуют другие флуоресцентные частицы нанометровых размеров. Примером являются кремниевые наночастицы с ковалентно привязанными к поверхности органическими красителями, которые имеют существенно более низкую токсичность по сравнению с квантовыми точками. Известны также наночастицы, образованные из полимерных органических соединений. Другим примером являются золотые и серебряные нанокластеры, синтезированные на матрице с ДНК, которые демонстрируют флуоресцентные свойства, состоя при этом всего из нескольких атомов металла.


text: Флуоресцентные вещества, применяемые в биологии, можно условно разделить на две большие группы: флуоресцентные зонды и флуоресцентные метки:


text: Наиболее распространёнными флуоресцентными метками в клеточной и молекулярной биологии являются флуоресцентные белки. Мечение зелёным флуоресцентным белком и его аналогами является рутинной процедурой, используемой при изучении структуры и функций белков в различных модельных организмах.


text: В наше время благодаря сочетанию технологий селективного ЗФБ-мечения белков, высокопроизводительной автоматической микроскопии и компьютерного анализа изображений возможно параллельное изучение локализации и функций сотен различных белков.


text: Флуоресцентные белки невозможно напрямую использовать для ковалентного мечения нуклеиновых кислот. Для того чтобы исследовать ДНК и РНК с помощью флуоресцентных протеиновых маркеров, используют следующий приём. В цепь нуклеиновой кислоты вводят последовательность, с которой селективно связывается определённый протеин (репрессор, фактор транскрипции и т. д.). Сам протеин метят нужным флуоресцентным белком. Флуоресцентно-маркированные родственные белки ДНК и РНК связываются со своими мишенями, показывая их пространственную локализацию. Практическими реализациями этой стратегии является визуализация ДНК в эукариотических клетках с помощью ЗФБ лактозного репрессора () для визуализации РНК с помощью λ системы.


text:
Согласно своему названию, флуоресцентный зонд имеет целью передавать исследователю информацию о среде, в которой он находится. Флуоресцентным зондом называется молекулярная конструкция, которая изменяет один из параметров флуоресценции (интенсивность, время жизни, максимум спектра флуоресценции), когда связывается со своей мишенью. Флуоресцентные зонды являются удобным инструментом для визуализации и квантификации распределения химических веществ, например сигнальных молекул в клетках.
Флуоресцентный зонд состоит из двух основных компонентов: 1) рецептора, который связывается с молекулой, которую надо обозначить (в аналитической химии её называют "аналитом"); 2) флюорофора, который реагирует на изменение окружения, меняя флуоресценцию. Существует большое количество механизмов, которые способны трансформировать связывание между рецептором и аналитом в изменение флуоресцентного сигнала. Например, при связывании рецептора с аналитом может варьироваться конформация молекулы, что приводит к удлинению или сокращению системы сопряжённых π-связей. Изменение конформации молекулы может влиять на расстояние между -парой, что также приведёт к заметным изменениям во флуоресценции. Образование новых координационных связей между рецептором и аналитом может активировать/блокировать перенос электрона в возбуждённом состоянии (), что является одним из механизмов тушения флуоресценции. Существуют также другие механизмы.


text: Флуоресцентный зонд может по-разному изменять флуоресценцию при связывании с аналитом, что схематично показано на рисунке: флуоресценция может расти (случай "А"), угасать ("В") или полностью изменить один из параметров, например, цвет (случай "С").


text: Примерами для первого случая (рост флуоресценции в присутствии аналита) являются многочисленные производные флуоресцеина и родамина в закрытой лактонной форме. Раскрытие лактонов с образованием открытой флуоресцентной формы при реакции с такими веществами, как перекись водорода, сероводород или оксид азота (NO) является методом выявления этих биологически важных молекул в живых организмах. Примером для второго случая (уменьшение флуоресценции при взаимодействии с аналитом) являются флуоресцентные зонды на хлорид-ионы: флуоресценция многих производных хинолина уменьшается в присутствии ионов хлора. Наконец, примером для третьего случая является Fura-2, один из первых ратиометрических зондов для ионов кальция, который меняет цвет флуоресценции при изменении концентрации ионов Ca в среде.


text: В некоторых случаях флуоресцентный зонд реагирует не на присутствие какого-то отдельного химического вещества, а изменение физических параметров среды, в которой он находится (температура, полярность, вязкость). Важным примером являются сольватохромные флуоресцентные красители — соединения, меняющие цвет флуоресценции в зависимости от полярности окружения. Сольватохромные флуоресцентные красители стали важным инструментом исследования липидного состава и фазовых переходов в липидных мембранах клеток. Другая группа соединений, которую называют флуоресцентными молекулярными роторами, меняет интенсивность флуоресценции в зависимости от вязкости среды. Интенсивность флуоресценции очень низка в обычных растворителях, тогда как при высоких значениях динамической вязкости среды интенсивность флуоресценции возрастает в десятки раз. С помощью флуоресцентных молекулярных роторов и конфокальной флуоресцентной микроскопии стало возможным исследовать вязкость среды внутри живых клеток. В течение последних лет флуоресцентные зонды стали незаменимыми средствами исследования живых клеток, обогатив клеточную биологию новыми быстрыми и точными методами количественного анализа.


text:
Секвенированием называют определение последовательности нуклеотидов в цепи нуклеиновой кислоты. Первые методы секвенирования были разработаны в 1970-х годах XX столетия. Ими были метод химической деградации Максама — Гилберта и метод, базирующийся на использовании дидезокситерминаторов по Сенгеру. Суть последнего состояла в энзиматическом удлинении праймера (короткого олигонуклеотида-затравки известной структуры) на молекуле ДНК неизвестной последовательности в присутствии специальных химически-модифицированных нуклеозидов — дидезокситерминаторов. Они похожи на обычные нуклеозид-трифосфаты, которые являются исходными соединениями для синтеза ДНК в организме, но отличаются от них отсутствием 3'-гидроксильной группы. Эти химические соединения могут инкорпорироваться в последовательность ДНК, которая синтезируется ДНК-полимеразой. Но после инкорпорации дидезокситерминатора синтез обрывается из-за отсутствия свободного 3'-гидроксила для образования нового фосфодиэстерной связи с последующим нуклеозидом.
В оригинальном методе Сэнгера использовалось энзиматическое удлинение праймера, меченного радиоактивным изотопом (Р на 5’гидроксильной группе) в четырёх разных пробирках. К каждой из них добавлялся небольшой процент одного определённого дидезокситерминатора. Из-за этого синтез в каждой пробирке обрывался в определённый момент, но всегда на позиции того нуклеотида, который был в форме дидезокситерминатора. По теории вероятности, в смеси, содержащей большое количество вновь образовавшихся молекул ДНК, накапливались все возможные последовательности, терминированные на всех возможных позициях, которые содержат нуклеотид, присутствующий в форме ddNTP. После завершения реакции все четыре реакционные смеси разделялись в полиакриламидном геле на четыре разные дорожки, распределение радиоактивных фрагментов считывалось радиоавтографией, после чего последовательность неизвестной ДНК можно было прочитать прямо на снимке.


text: Кроме использования радиоактивных изотопов, другим недостатком этого метода было большое количество операций, необходимое для обнаружения и считывания радиоактивного сигнала, а также необходимость использования четырёх дорожек для каждого анализа, потому что невозможно было различить разные терминированные фрагменты только по их радиоактивности.


text: Метод секвенирования с дидезокситерминаторами был существенно усовершенствован, когда радиоактивное мечение праймера было заменено на флуоресцентное мечение терминальных нуклеотидов. На рисунке показана структура дидезоксинуклеозид-трифосфатов, которые содержат флуоресцентные красители, привязанные ковалентными связями к азотистым основаниям. Было обнаружено, что такие модификации азотистых оснований минимально влияют на распознавание трифосфатов ДНК-полимеразами, поэтому они могут встраиваться в синтезированную ДНК наряду с обычными дНТФ. В случае с флуоресцентными дидезокситерминаторами при терминации синтеза ДНК происходит её флуоресцентное мечение. Использование флуоресцентных красителей четырёх цветов для кодирования каждого из природных нуклеозидов позволило проводить синтез в одной пробирке и разделение на одной дорожке геля. Более того, флуоресцентная детекция оказалась более чувствительной и быстрой по сравнению с радиоактивной, позволяя проводить определение нуклеотидов в реальном времени.


text: В результате в конце 1980-х удалось разработать автоматические системы для секвенирования ДНК с разделением терминированных фрагментов в капиллярном варианте гель-электрофореза и с детекцией каждой «буквы» в последовательности по её специфическому цвету флуоресценции.


text: Хотя именно благодаря этому методу была расшифрована значительная часть ДНК человека, секвенирование по Сангеру уже не актуально из-за существования более быстрых, дешёвых и эффективных методов новых поколений. Многие из них также базируются на флуоресцентной детекции. Например, секвенирование с помощью синтеза () также использует кодировку четырьмя разными цветами флуоресценции для каждой из четырёх букв генетического кода.


text: Молекулы ДНК состоят из двух цепей полинуклеотидов, которые комплементарны друг другу. Азотистые основания двух цепей образуют пары, которые стабилизированы водородными связями. Характерной чертой нуклеиновых кислот является способность к молекулярному узнаванию, благодаря которой одноцепные фрагменты ДНК имеют сродство с комплементарными фрагментами.


text: На основе явления гибридизации были созданы методы анализа последовательностей нуклеиновых кислот с использованием синтетических флуоресцентно-меченых олигонуклеотидов.


text: Одним из них является флюоресцентная гибридизация "in situ" (), которая используется для выявления точной локализации определённых последовательностей ДНК на метафазных хромосомах. Во флуоресцентной гибридизации "in situ" используют синтетические олигонуклеотиды-зонды. Каждая последовательность-зонд ковалентно соединена с флюорофором определённого цвета. Такие зонды вводятся в клетки, после чего остаются на определённое время, для того чтобы состоялась гибридизация между зондами и комплементарными регионами хромосомной ДНК. Зонды, которые не гибридизировались, удаляются промыванием, после чего характерная окраска хромосом изучается с помощью флуоресцентной микроскопии.


text: Кроме локализации единичных генов на хромосомах, FISH позволяет исследовать колокализацию фрагментов ДНК. Благодаря этому метод полезен для цитологии и генетики. Так, если использовать для гибридизации с хромосомной ДНК два зонда, меченных красным и зелёным флюорофорами, места колокализации этих последовательностей на хромосомах будут выглядеть как жёлтые точки.


text: Часто стоит задача определить, содержится ли последовательность ДНК нужной структуры в растворе, например в клеточном экстракте или в смеси продуктов полимеразной цепной реакции. Флюоресцентная гибридизация "in situ" для этого непригодна, потому что при связывании меченой ДНК с мишенью не произойдет изменения флуоресценции, а отделить связанный и несвязанный зонд, как в случае с хромосомами, невозможно из-за их одинаковой растворимости и других физико-химических свойств.


text: Элегантный метод для решения этой задачи был найден в 1996-м году и получил название «молекулярные маяки» (, ). Структура и принцип работы ММ-зондов изображены на рисунке.


text: ММ-зонд является одноцепочечным фрагментом ДНК, состоящим из двух участков: петли ("на рис." красная) и основы (чёрная). Последовательность нуклеотидов в петле выбирается таким образом, чтобы быть комплементарным той последовательности, которую надо обозначить (мишени). Две части основы комплементарны друг другу, и поэтому образуют стабильную структуру при отсутствии мишени. Конечные гидроксильные группы одноцепочечной ДНК ковалентно модифицируются флюорофором (F) с одной стороны и гасителем флуоресценции (Q) с другой. При отсутствии мишени зонд находится в закрытом состоянии: флюорофор и гасители находятся друг возле друга, из-за чего флуоресценция «выключена». В присутствии ДНК-мишени может образовываться гибридная структура, в которой центральная петля комплементарна мишени, поэтому ММ-зонд «раскрывается». В таком состоянии концы, которые изначально образовывали основу зонда, оказываются разнесены на значительное расстояние в пространстве. Соответственно в таком состоянии гасители не могут эффективно гасить флюорофор, что приводит к значительному росту интенсивности флуоресценции.


text: Оригинальный метод обозначения ДНК с помощью ММ-зондов претерпел многочисленные усовершенствования. Например, существуют модификации, которые базируются на использовании резонансного переноса энергии. Вместо пары «флюорофор-гасители» концы одноцепочечного ДНК-зонда метят двумя флюорофорами, которые образуют -пару; за счёт этого наличие ДНК-мишени можно определять по исчезновению флуоресценции акцептора и росту флуоресценции донора.


text: Важной областью применения ММ-зондов стала количественная полимеразная цепная реакция (ПЦР). ММ-зонд, комплементарный центральному региону последовательности, которая амплифицируется, добавляют в реакционную смесь до начала реакции. После старта реакции интенсивность флуоресценции измеряется на каждом цикле амплификации. Если в результате ПЦР амплифицируется фрагмент, комплементарный зонду, интенсивность флуоресценции растёт пропорционально концентрации продукта в смеси. Благодаря этому возможно оценить количество исходной ДНК, которое было в начале амплификации. Более того, возможно наблюдать за амплификацией нескольких вариантов последовательности ДНК в одной смеси, если использовать комбинацию ММ-зондов, закодированных разными цветами флуоресценции. Этот приём нашёл использование в генетическом анализе для идентификации различных аллелей одного гена.


text: Во флуоресцентной микроскопии ММ-зонды используются для изучения уровня экспрессии генов путём визуализации мРНК в цитоплазме. Когда определённый ген начинает транскрибироваться, в цитоплазме растёт концентрация соответствующей мРНК. Если синтезировать ММ-зонд с петлей, которая комплементарна участку мРНК, такой зонд будет гибридизироваться с ней, увеличивая при этом интенсивность своей флуоресценции. За счёт этого можно узнать локализацию соответствующей мРНК в клетке и оценить уровень экспрессии по росту флуоресценции.


text: В организмах высших эукариот содержатся тысячи генов, совокупная работа которых определяет фенотип организма. Для быстрого одновременного исследования большого количества генов была разработана технология микромассивов ДНК.


text:
Микромассив ДНК представляет собой твёрдую поверхность, на которую нанесено большое количество индивидуальных олигонуклеотидов. Каждый элемент массива на поверхности содержит ДНК одного определённого строения, которое программируется при создании массива. Одним из методов создания ДНК-микромассивов является химический твердофазный синтез ДНК с использованием фотоактивных защитных групп.
Эта технология оказалась удобной для анализа уровня экспрессии генов в клетках. Для этого нужен ДНК-микромассив, содержащий набор олигонуклеотидных маркеров, специфических для каждого из генов, которые нужно исследовать. Для того, чтобы сравнить уровень экспрессии в двух образцах, контрольном и исследуемом, проводят следующие операции.


text: Клетки обоих образцов обрабатывают специальными химическими реагентами и экстрагируют матричную РНК, которая содержится в цитоплазме. РНК каждого образца инкубируют в присутствии обратной траскриптазы и флуоресцентных маркеров определённого цвета, в результате чего образуются флуоресцентно-меченые молекулы кДНК. Так, например, на рисунке, кДНК образца "А" была помечена красным флюорофором, а кДНК образец "В" — зелёным. После этого образцы смешивают и гибридизируют на микромассиве. В результате молекулы кДНК гибридизируются в ячейке, которая соответствует их гену. Анализ цвета флуоресценции в каждой ячейке показывает разницу в уровне экспрессии соответствующего гена в обоих образцах. Если ячейка имеет красный цвет, это значит что при гибридизации раствора на микромассиве в нём содержалось больше кДНК из клеток, "А", следовательно уровень экспрессии гена в клетках "А" был более высоким. Если ячейка имеет зелёный цвет, значит уровень экспрессии был выше в клетках "В". Наконец, жёлтый цвет свидетельствует о том, что клетки содержали одинаковое количество мРНК, следовательно уровень экспрессии этого гена у них был одинаковый.


text: Некоторые низкомолекулярные органические красители проявляют аффинность к определённым биомолекулам или целым клеточным органеллам. Это явление используется для селективной мультицветной окраски клеток во флуоресцентной микроскопии. Отдельные примеры красителей приведены в таблице.


text: Одним из наиболее распространённых красителей для ядерной ДНК является 4',6-диамидино-2-фенилиндол, DAPI. Он способен селективно связываться с ДНК на А-Т обогащённых участках, демонстрируя яркую синюю флуоресценцию с максимумом на 461 нм. Способность окрашивать хромосомную ДНК демонстрируют такие соединения, как Hoechst 33342, а также некоторые цианиновые красители. Существуют также флуоресцентные красители, которые преимущественно окрашивают G-квадруплексы.


text: Митохондрии обладают большим отрицательным мембранным потенциалом (около −180 mV), за счёт чего могут селективно окрашиваться катионными флуоресцентными красителями, такими как MitoRed.


text: Существенным недостатком использования малых органических соединений в качестве флуоресцентных красителей является низкая селективность мечения клеточных компонентов. Например, соединения, которые связываются с хромосомной ДНК, могут в той или иной степени окрашивать другие нуклеиновые кислоты, содержащиеся в клетке; липофильные красители, окрашивающие липидные мембраны, могут также связываться с гидрофобными сайтами белков.


text: Селективного флуоресцентного мечения внутриклеточных структур можно достичь с помощью иммунофлуоресцентного окрашивания клеток. Этот метод сочетает селективность традиционных методов иммуноокраски с чувствительностью флуоресцентной детекции.


text: Как и классическая иммуноокраска, этот метод базируется на использовании антител. Антитела — это белковые молекулы, которые с высокой афинностю и селективностью связываются со своими мишенями. Каждое антитело распознаёт свой определённый антиген.


text: При иммунофлуоресцентной окраске используют сразу два типа антител. Первичное антитело связывается непосредственно с объектом окраски. После этого вторичное антитело, которое ковалентно модифицировано молекулой флюорофора, связывается с первичным антителом. Таким образом, мишень, которая будет нести антиген, окрасится за счёт образования комплекса с двумя антителами.


text: Использование двух антител, первичного и вторичного, необходимо для обеспечения гибкости метода, то есть ради возможности варьировать окраски различных мишеней без необходимости получения и химической модификации новых антител.


text: Недостатком иммунофлуоресцентной покраски является низкая проницаемость антител сквозь клеточные мембраны. Вследствие этого данный метод чаще всего используется для окраски фиксированных клеток.


text: Генетически запрограммированные автофлуоресцентные белки, созданные на базе зелёного флуоресцентного белка (ЗФБ) и его аналогов, являются незаменимыми флуоресцентными маркерами клеточной и молекулярной биологии.


text: Преимуществами автофлуоресцентных белков является возможность их визуализации в клетке без введения каких-либо дополнительных красителей или химических реагентов. Генетическое мечение клеточных белков флуоресцентными белковыми маркерами можно реализовать, не меняя конформацию и биохимические свойства маркированного белка. Вследствие чего маркировка белков ЗФБ используется для изучения уровня экспрессии белков в клетках.


text: Кроме пассивных флуоресцентных маркеров, которые просто сигнализируют о наличии и локализации белка, к которому они привязаны, на базе ЗФБ были созданы флуоресцентные зонды, которые меняют флуоресценцию в зависимости от концентрации ионов, сигнальных молекул и других факторов среды, в которой они находятся.


text: Для флуоресцентной микроскопии необходимы микроскопы специальной конструкции. Сильно упрощённая схема такого микроскопа (а именно схема растрового конфокального эпифлуоресцентного микроскопа) показана на рисунке. Он имеет следующие особенности строения:


text: Кроме растровых конфокальных микроскопов существуют другие типы этих приборов.


text: В растровом флуоресцентном конфокальном микроскопе изображение создаётся последовательным перемещением луча лазера от точки к точке кадра, регистрацией флуоресценции и последующей реконструкцией изображения на компьютере. Как оказалось, этот метод имеет некоторые недостатки. Явление дифракции накладывает определённые физические ограничения на минимальный размер сфокусированного лазерного луча, а следовательно, и на максимальное пространственное разрешение метода.


text: Впоследствии выяснилось, что этот дифракционный барьер может быть преодолён многими различными методами, что открывало возможности для оптической флуоресцентной микроскопии сверхвысокого разрешения.


text: Одним из первых способов стала STED-микроскопия (микроскопия на основе подавления спонтанного испускания). В основе этого метода лежит взаимодействие флюорофоров, возбуждённых обычным лазерным импульсом, с последующим STED-импульсом. Если возбуждённые молекулы флюорофора облучить электромагнитным импульсом, который по энергии соответствует ожидаемой энергии флуоресценции, происходит принудительное подавление эмиссии. Флюорофоры, которые попали под STED-импульс, не могут флуоресцировать. Если варьировать фазы возбуждающего и STED-импульсов, можно получить различную их локализацию в пространстве. Так, рисунок справа показывает проекцию начального лазерного импульса, форму STED-импульса, и участок, содержащий возбуждённые флюорофоры после наложения двух импульсов.


text: Благодаря этому была уменьшена площадь, с которой регистрируется флуоресценция, а следовательно, повышено пространственное разрешение метода. На фотографии слева показаны для сравнения два изображения одного и того же объекта, сделанные с использованием растровой конфокальной и STED-микроскопии.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Эгидий (, ; вторая половина VI века) — епископ Реймса (около 560—590).


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Основными историческими источниками о жизни Эгидия являются «История франков» Григория Турского и «История Реймсской церкви» Флодоарда.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: О происхождении Эгидия ничего не известно, но на основании ономастических данных предполагается, что его семья могла быть связана родственными узами с римским военным магистром Эгидием. О знатном происхождении епископа Эгидия упоминал и Венанций Фортунат.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Точная дата восшествия Эгидия на кафедру Реймсской епархии неизвестна. Предполагается, что он возглавил епархию около 560 года, став преемником скончавшегося епископа Мапина. Первое упоминание об Эгидии как епископе датировано 5 июня 565 года.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Современники Эгидия описывали его как весьма деятельного прелата, но при этом обладавшего чрезмерной гордыней. Венанций Фортунат хвалил епископа Реймса за его набожность и красноречие. По просьбе Эгидия Венанций написал стихотворное житие святого Ремигия, сохранившееся только во фрагментах.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Эгидий возглавлял интронизацию Григория Турского как главы епархии. Хотя эта торжественная церемония, состоявшаяся в Меце 24 августа 573 года, и не соответствовала всем церковным традициям, на ней присутствовали король Австразии Сигиберт I и его супруга Брунгильда. Королевская чета оказывала покровительство Эгидию, предоставив ему и его епархии множество даров и привилегий. В ответ епископ с полной покорностью исполнял любую волю правителя Австразии, даже если желание монарха противоречило церковным канонам. Так, по требованию Сигиберта епископ Реймса возвёл на кафедру Шатодёна некоего Промота, хотя против выступало духовенство этой епархии. Епископ Шартра Папполь, суффраганом которого был епископ Шатодёна, поднял вопрос о неканоничности поставления Промота на церковном соборе в Париже 11 сентября 573 года. Участники собрания осудили действия Эгидия, указав, что только Папполь, как митрополит Шатодёнской епархии, мог проводить церемонию интронизации нового епископа. Несмотря на постановление собора, до самой смерти короля Сигиберта I Промот продолжал оставаться главой своей епархии.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: После убийства в 575 году Сигиберта I, при королевском дворе которого Эгидий имел очень большое влияние, престол Австразии унаследовал его ещё несовершеннолетний сын Хильдеберт II. В это время Эгидий входил в возглавляемую герцогом Гунтрамном Бозоном группу австразийской знати, выступившую против регентства Брунгильды. Во время малолетства Хильдеберта Эгидий играл важную роль в управлении Австразией, ещё больше усилив своё влияние на придворные дела.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Однако, часто посещая как посол королевский двор Нейстрии, епископ стал близким другом короля Хильперика I и его супруги Фредегонды. Григорий Турский даже сообщал, что в 577 году Эгидий вместе с Гунтрамном Бозоном содействовал Фредегонде в убийстве принца Меровея. В 581—583 годах епископ Реймса был главой всех посольств, которые Хильдеберт II посылал к Хильперику I. В 581 году Эгидий был одним из инициаторов заключения союза между королями Хильдебертом и Хильпериком. Союз, скреплённый признанием короля Австразии наследником владений короля Нейстрии, был направлен против короля Бургундии Гунтрамна, что сделало епископа личным врагом этого монарха. Когда в 583 году между правителями франков началась война, епископ Реймса лично принял участие в походе. Однако австразийское войско шло слишком медленно и не смогло оказать помощь нейстрийцам, которые были разгромлены войском Гунтрамна. Это поражение вызвало мятеж среди австразийских воинов: они забросали епископа камнями и убили бы его, если бы он не ускакал от них на лошади. Эгидий был столь напуган произошедшим, что, по словам Григория Турского, «"потеряв с одной ноги сапог, не подобрал его"» и в таком виде прибыл в Реймс. Ещё более плачевно сказалось на карьере Эгидия заключение мира между Хильдебертом II и Гунтрамном: по просьбе правителя Бургундии король Австразии отдалил от себя главу Реймсской епархии.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: По свидетельству Григория Турского, впавший в немилость Эгидий в 585 году оказался замешанным в дело Гундовальда, объявившего себя сыном короля Хлотаря I и захватившего власть над Аквитанией, а в 587 году — в возглавленный герцогом Раухингом мятеж представителей австразийской знати против Хильдеберта II. Многие участники этих заговоров были казнены или сосланы, но Эгидию удалось добиться королевского прощения. Вопреки воле короля Гунтрамна, с епископом также примирился и герцог Шампани Луп, долгие годы бывший врагом Эгидия.


title: Эгидий (епископ Реймса)

text: Однако в 590 году и Эгидий был обвинён в соучастии в заговоре с цель убийства короля Хильдеберта II. По приказу короля Хильдеберта II епископ был похищен из своей резиденции и заключён под стражу в Меце. В начале октября в Вердене был созван поместный собор, участники которого вступились за Эгидия, потребовав от короля возвратить свободу епископу. Однако Хильдеберт II не освободил узника, лишь отослав его обратно под стражей в Реймс. По требованию короля епископы Австразии снова собрались в середине ноября в Меце. От имени Хильдеберта Эгидий был обвинён в преступных сношениях с королём Хильпериком I, в намерении убить короля Австразии, в разжигании вражды между Хильдебертом и Гунтрамном и в подделке королевских грамот о привилегиях Реймсской епархии и земельных дарениях. Хотя первоначально епископ отверг обвинения, показания многочисленных свидетелей вынудили его признаться во всех злоумышлениях. В результате участники собора признали Эгидия виновным в измене и постановили изгнать его с занимаемой им кафедры. Новым главой Реймсской епархии стал Ромульф, сын герцога Лупа. Неправедно накопленные Эгидием богатства были конфискованы в пользу короля, а сам бывший епископ сослан в Страсбург. Здесь он и скончался.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Бла́нка Нава́ррская (, ;  — ) — графиня Шампани, жена графа Тибо III Шампанского, затем регент Шампани и регент королевства Наварра.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Бланка была младшей дочерью короля Санчо VI Наваррского и Санчи Кастильской, умершей через два года после рождения Бланки. По материнской линии она была внучкой Альфонсо VII Кастильского и Беренгелы Барселонской. Её старший брат, Санчо VII Наваррский, унаследовал от отца Наварру и был последним представителем рода Хименесов на троне Наварры, поскольку умер бездетным. Её брат Рамиро был епископом Памплоны, а старшая сестра Беренгария Наваррская стала женой Ричарда I Львиное Сердце.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Бланка вышла замуж за графа Тибо III Шампанского 1 июля 1199 года в Шартре. Невесте было 22 года, жениху — 20. Тем не менее, Тибо III умер молодым 24 мая 1201 года во время подготовки к Четвертому крестовому походу, оставив Бланку на последнем месяце беременности. Бланка поспешила в Санс, где находился король Филипп II Август, которому она принесла вассальную присягу как пфальцграфиня Труа. Также были принесены оммажи архиепископу Реймса Гийому (дядя покойного Тибо III) и герцогу Бургундскому Эду III и приняты присяги крупнейших вассалов, включая Людовика I графа Блуа и Шартра и Гильома I графа Сансера (двоюродные братья Тибо III). Таким образом Бланка, получив признание от главных действующих лиц, закрепила Шампань за собой и своими детьми, которые получили протекцию короля Франции. Кроме того было утверждено вступление Бланки во владение вдовьей долей (Эперне, Вертю, Сезанн, Шантeмерль, Пон-сюр-Сен, Ножан-сюр-Сен и Мери-сюр-Сен). Со своей стороны Бланка обещала не вступать в брак без санкции короля и передавала королю во временное пользование два пограничных замка Бре-сюр-Сен и Монтро-Фот-Йон.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Когда она родила сына Тибо (30 мая 1201 года), он сразу же приобрел титул графа Шампанского. Бланка правила графством в качестве регента, пока Тибо не исполнился 21 год. Обстановка в графстве в период регентства была непростой: предшественник и сводный брат графа Тибо III Генрих оставил в наследство большие долги.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Кроме того, наследственные права юного Тибо попытались оспорить дочь Генриха Филиппа и её муж, Эрард I де Бриенн, один из наиболее влиятельных шампанских дворян. Конфликт с Бриеннами вылился в открытую войну в 1215 году, известную как Война за Шампанское наследство, и прекратился лишь после достижения Тибо IV совершеннолетия в 1222 году. Тибо IV и Бланка выкупили свои наследственные права у Бриеннов за солидную сумму. Бланка также организовала приданое старшей дочери Генриха Алисе Шампанской, выданной за короля Кипра Гуго I. В 1230-х годах, для того, чтобы рассчитаться с Алисой, Тибо IV был вынужден продать свои права на графства Блуа, Сансер и Шатодюн Людовику IX Французскому.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Завершив период своего регентства в 1222 году, Бланка удалилась в цистерцианский монастырь Арженсоль (Argensolles), строительство которого она финансировала.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Так как некоторые бароны подозревали Тибо IV в причастности к смерти короля Людовика VIII Французского в ноябре 1226 года, Бланка вместо сына получила приглашение на коронацию Людовика IX.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: В какой-то момент Бланка взяла на себя управление королевством Наварра, когда её брат Санчо VII Наваррский решил отойти от дел («El Encerrado»).


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Бланка умерла 13 марта 1229 года в возрасте 52 лет.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: После её смерти, Санчо VII Наваррский формально оставался королём Наварры, а её сын Тибо IV продолжал править Шампанью. Их старшая сестра, Беренгария Наваррская, вдовствующая королева Англии, умерла в 1232 году, не оставив потомства, оставив бездетного Санчо VII последним потомком королевского рода Наварры. Когда он умер в 1234 году, следующим королём Наварры был признан сын Бланки Тибо IV под именем Тибо IV. Тибо IV был женат дважды при жизни Бланки и имел одну дочь к моменту её смерти, которую также назвали Бланкой. Позднее третья жена Маргарита де Бурбон родила ему шестерых детей, в том числе будущих королей Наварры Теобальдо II и Генриха I, и вопрос наследования был благополучно решен.


title: Бланка Наваррская (графиня Шампани)

text: Бланка родила графу Тибо III двоих детей:


title: O&O Defrag

text: O&O Defrag — это утилита, созданная немецкой компанией O&O Software и предназначенная для дефрагментации жёсткого диска.


title: O&O Defrag

text: Программа имеет пять режимов работы: «Скрытый», «Свободное место», «Полный/Имя», «Полный/Изменен», «Полная/Доступ».По желанию пользователя при установке программы также устанавливается скринсейвер, и при бездействии компьютера запускается дефрагментация.


title: Черняны

text: Черняны — название населённых пунктов:


title: Женская сборная Македонии по волейболу

text: Женская национальная сборная Македонии по волейболу () — представляет Республику Македония на международных соревнованиях по волейболу. Управляющей организацией выступает Волейбольная федерация Македонии "(Одбојкарска федерација на Македонија — ОФМ)".


title: Женская сборная Македонии по волейболу

text: После распада Югославии и получения в 1992 Македонией независимости Волейбольная федерация этой страны вступила в ФИВБ и ЕКВ. Первое появление женской сборной Македонии на официальной международной арене произошло только через 6 лет во время отборочного турнира чемпионата Европы 1999 (категория «В»). В своём дебютном матче 31 мая 1998 года македонские волейболистки на выезде обыграли сборную Финляндии со счётом 3:1. Последующие три игры в своей группе сборная Македонии всухую проиграла командам Турции (дважды) и Греции, после чего снялась с соревнований.


title: Женская сборная Македонии по волейболу

text: В дальнейшем сборная Македонии лишь эпизодически участвовала в официальных международных соревнованиях под эгидой ФИВБ и ЕКВ. Команда ещё дважды принимала участие в квалификации чемпионатов Европы (2001 и 2009), а также в отборочном турнире чемпионата мира 2014. В этих турнирах македонские волейболистки ни разу не выиграли и потерпели 13 поражений. Таким образом победа, одержанная македонками в своём дебютном матче, до сих остаётся единственной официальной для сборной этой бывшей югославской республики. В рейтинге европейских сборных сборная Македонии находится лишь в пятом десятке. Объясняется это тем, что волейбол в этой небольшой европейской стране отстаёт по популярности от таких игровых видов спорта как футбол, гандбол и баскетбол.Сборная Македонии в отборочном турнире чемпионата мира 2014 (май 2013 года)


title: Крушельницкий, Ярослав Александрович

text: Яросла́в Алекса́ндрович Крушельни́цкий (16 марта 1983, Гузар, Узбекская ССР, СССР) — узбекский футболист, защитник.


title: Крушельницкий, Ярослав Александрович

text: Выступал во многих клубах Узбекистана. За рубежом играл за российский «Ротор», иранский «Мес Сарчешмех», малайзийский «Фелда Юнайтед». В составе последнего клуба стал серебряным призёром второй по значимости лиги страны и финалистом кубка ассоциации футбола Малайзии.


title: Крушельницкий, Ярослав Александрович

text: Итого: 4 матча / 0 голов; 1 победа, 1 ничья, 2 поражения.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: Шимановский Владимир Иванович (1879—1918) — русский революционер, социал-демократ, инженер путей сообщения, участник борьбы за власть Советов на Дальнем Востоке, председатель Центрального комитета Амурской железной дороги. Сыграл важную роль в мобилизации отрядов железнодорожников — красногвардейцев на подавление Гамовского мятежа.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: Дед, Никифор Фёдорович Шимановский, был священником Бобруйского уезда Могилёвской губернии. Его сын Иван Никифорович переселился на Дальний Восток, был военным врачом в Благовещенске.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: Владимир, окончив гимназию в 1900 году, поступил в Томский технологический институт. В Томске вступил в РСДРП, участвовал в студенческих волнениях 1903 г. Принял активное участие в революционных событиях 1905 года.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: После перерыва продолжил учёбу в Петербургском технологическом институт, который окончил в 1909 году.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: Вернувшись в Благовещенск, работал преподавателем геометрии и электротехники в Речном училище, несколько лет являлся председателем Амурского общества изучения Сибири, составил проект сооружения городского водопровода. Благодаря вмешательству Шимановского, удалось добиться финансирования Благовещенского городского краеведческого музея, перевода его фондов в новое здание. Затем работал в управлении строительства Амурской железной дороги.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: С 9 августа 1916 года — начальник главных мастерских Амурской железной дороги в Зилово. В 1917 году Шимановский возглавил Гондаттиевский Совет рабочих депутатов. В феврале 1918 г. амурские железнодорожники избрали его председателем Центрального комитета Амурской железной дороги, который фактически был главным административным органом власти на Амурской железной дороге.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: Шимановский сыграл важную роль в мобилизации отрядов железнодорожников — красногвардейцев на подавление Гамовского мятежа. Много сделал для налаживания нормальной работы Амурской железной дороги, для перевозки военных грузов из Владивостока в центр страны.


title: Шимановский, Владимир Иванович

text: В сентябре 1918 года по приказу главы Амурского белогвардейского правительства Алексеевского Шимановский был арестован, предан военно-полевому суду и 20 ноября 1918 года расстрелян в Благовещенске.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: Александр Анатольевич Мингалёв (28 марта 1990, Тобольск, Тюменская область) — российский биатлонист, ранее выступавший за Белоруссию. Призёр всемирной Универсиады, чемпион и призёр чемпионатов России. Мастер спорта России международного класса (2015). Завершил карьеру после сезона 2017/2018.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: Биатлоном начал заниматься под руководством своей сестры Ольги Анатольевны Мингалёвой. В этот вид спорта он пришёл в 2006 году. По возвращении из Белоруссии также тренируется у Максима Кугаевского.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: Не сумев попасть в юношеские сборные России, Александр Мингалёв решил переехать в соседнюю Белоруссию. Под флагом этой страны он выступал на нескольких Чемпионатах мира среди юниоров — в 2009 году в Канморе выступал среди спортсменов до 19 лет, был четвёртым в эстафете, а в личных видах лучшим результатом стало шестое место в индивидуальной гонке. Среди более старших юниоров выступал в 2010 году в Турсбю и в 2011 году в Нове-Место, лучшим результатом стало 14-е место в индивидуальной гонке. Также участвовал в юниорских чемпионатах Европы в 2010 и 2011 году, но не поднимался выше десятого места.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: В сезоне 2010/11 стартовал в гонках Кубка IBU среди взрослых, лучший результат — 48-е место в гонке преследования на этапе в Анси. По окончании сезона принял решение вернуться в Россию.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: Своего первого успеха на российских соревнованиях биатлонист добился в 2013 году. Мингалёв выиграл гонку преследования на первенстве страны (до 26 лет) в Уфе.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: В декабре этого же года он вошёл в состав сборной России на Всемирную Зимнюю Универсиаду в итальянском Трентино. В первой же гонке Мингалёв выиграл медаль, став вторым в индивидуальной гонке.


title: Мингалёв, Александр Анатольевич

text: На уровне чемпионата России неоднократно выигрывал медали, в том числе в 2016 году стал двукратным чемпионом — в одиночной смешанной эстафете и командной гонке.


Чемпионат Македонии по волейболу среди женщин — ежегодное соревнование женских волейбольных команд Республики Македония. Проводится с сезона 1992/93.


title: Чемпионат Македонии по волейболу среди женщин

text: Соревнования проходят в трёх дивизионах — 1-й, 2-й и 3-й лигах. Организатором чемпионатов является Волейбольная федерация Македонии.


text: Чемпионат в 1-й лиге проводится в два этапа — предварительный и плей-офф. На предварительной стадии команды-участницы проводят двухкруговой турнир. По его итогам лучшие 4 команды выходят в плей-офф и далее определяют финалистов, которые разыгрывают первенство. Серии матчей проводятся до двух (полуфинал) и до трёх (финал) побед одного из соперников.


text: За победы со счётом 3:0 и 3:1 команды получают 3 очка, 3:2 — 2 очка, за поражение со счётом 2:3 — 1 очко, 0:3 и 1:3 — 0 очков.


text: В чемпионате 2017/18 в 1-й лиге участвовали 10 команд: «Планет» (Скопье), «Универзитет» (Тетово), «Янта Волей» (Скопье), «Куманово», «Наковски Волей» (Струмица), «Виктори Волей» (Струмица), «Бами Кор» (Тетово), «Пелистер» (Битола), «УГД-Студент» (Штип), «Македония Макс» (Струмица). Чемпионский титул выиграла команда «Янта Волей», победившая в финальной серии «Куманово» 3-1 (0:3, 3:1, 3:0, 3:1). 3-е место заняла команда «Планет».Чемпионат Македонии по волейболу среди мужчин


title: Эндес, Кит

text: Кит Эндес (; 1920—2005) — американский актёр радио, театра, кино и телевидения, певец.


title: Эндес, Кит

text: Джон Чарльз Эндес (настоящее имя актёра) родился 12 июля 1920 года в городе , штат Нью-Джерси. В 12 лет впервые выступил по радио. Учился в высшей школе , затем в Оксфордском университете, окончил Университет Темпл и Филадельфийскую музыкальную консерваторию (ныне ).


title: Эндес, Кит

text: В начале 1940-х годов начал играть на Бродвее, обладая мягким баритоном, пел в опереттах, впервые на широком экране появился в 1944 году в фильме , но в титрах указан там не был, затем с 1947 года стал сниматься регулярно; впервые на телеэкранах появился в 1955 году.


title: Эндес, Кит

text: Некоторую роль в успешном старте кино-карьеры Эндеса сыграло то, что он был внешне похож на известного актёра Скипа Хомейера (1930—2017).


title: Эндес, Кит

text: С 1948 по 1961 год был женат на Джин Элис Коттон (развод, двое сыновей: , род. 1948, музыкант; и Мэтт Эндес), затем — на Шеле Хэкетт (развод, детей нет).


title: Эндес, Кит

text: Свою карьеру Кит Эндес закончил в 1980 году в связи с проблемами со здоровьем: у него был диагностирован рак мочевого пузыря и ряд сопутствующих болезней. В связи с этим 11 ноября 2005 года актёр «совершил самоубийство путём асфиксии», согласно .За 33 года своей кино-карьеры Кит Эндес снялся в 68 фильмах и сериалах.


title: Уильямс, Тед (бейсболист)

text: Теодор Самуэль Тед Уильямс (, 30 августа 1918 — 5 июля 2002) — американский профессиональный бейсболист и менеджер. Всю свою 19-летнюю карьеру в Главной лиге бейсбола провёл на позиции левого филдера в клубе «Бостон Ред Сокс» (1939—1942 и 1946—1960). Считается одним из лучших отбивающих в истории бейсбола. Уильямс дважды становился самым ценным игроком Американской лиги, шесть раз лидером лиги по отбиванию, 17 раз участвовал в матчах всех звёзд МЛБ и дважды становился обладателем Тройной короны. Его процент отбивания является самым высоким среди игроков МЛБ, сделавших более 500 хоум-ранов. За его заслуги в 1966 году он был включён в Национальный бейсбольный Зал славы.


title: Уильямс, Тед (бейсболист)

text: Тед Уильямс родился и вырос в Сан-Диего (штат Калифорния) и начал играть в бейсбол ещё в детстве. С 1939 года он стал выступать за «Бостон Ред Сокс», где почти сразу стал одним из лучших отбивающих. В 1941 году его средний процент отбивания уже составлял 40,6 %, таким образом он стал последним игроком МЛБ, отбившим более 40 % подач в сезоне. В 1943 году он был вынужден прервать свою профессиональную карьеру, чтобы принять участие во Второй мировой войне в составе военно-морских сил США. После возвращения в МЛБ в 1946 году он выиграл свой первый титул самого ценного игрока АЛ и принял участие в единственной в его карьере Мировой серии. В следующем сезоне он выиграл вторую Тройную корону. В 1952 и 1953 году он участвовал в Корейской войне. В 1957 и 1958 годах он в пятый и шестой раз в своей карьере становился лидером АЛ по отбиванию.


title: Уильямс, Тед (бейсболист)

text: После завершения игровой карьеры в 1960 году, он с 1969 по 1972 года занимал пост менеджера «Вашингтон Сенаторс/Техас Рейнджерс». Будучи заядлым рыболовом, он вёл передачу о рыбалке и был выбран в Зал Славы рыбалки IGFA. В 1991 году президент США Джордж Буш наградил его президентской медалью Свободы — высшей наградой США для гражданских лиц. В 1997 году он был выбран в сборную всех времён МЛБ, а в 1999 году в сборную столетия МЛБ.


title: Литовское национальное пробуждение

text: Литовское национальное движение (традиционно известное в историографии как Литовское национальное пробуждение ) — борьба литовцев за право на своё национальное самоопределение. Связано с тем, что в XVIII веке Литва вошла в состав Российской империи в результате Разделов Речи Посполитой. Привело к формированию современной литовской нации и к восстановлению независимости Литвы. Наиболее активными участниками этого движения были Винцас Кудирка, Йонас Басанавичюс и др. Влияние на движение оказал подъём в Европе романтического национализма, национально-освободительных движений.


title: Литовское национальное пробуждение

text: Из-за длительного периода общей польско-литовской государственности и национальной принадлежности, и политики русификации Российской империи многие из литовских дворян в XIX веке подверглись полонизации, и литовский язык использовался только бедными и средними слоями общества, а часть средних слоёв, как правило, использовала польский для своего социального продвижения. Литовский был разговорным языком, он не считался достаточно престижным для письменного использования. Его сохраняла часть мелкого дворянства, особенно в Жемайтии. Язык был ещё не стандартизирован, его грамматика значительно различалась от региона к региону в виде аукштайтского и жемайтийского диалектов. Ожидалось, что литовский язык бы вымер, так как восточные территории современной Литвы и северо-западной Беларуси стали более славизированными, и многие использовали польский или белорусский языки в повседневной жизни. В начале XIX века использование литовского языка в значительной степени ограничивается литовскими сельскими районами; единственная область в Литве, где литовский язык использовался в качестве литературного, была Малая Литва, находившаяся под властью Пруссии. Но и там приток немецких иммигрантов угрожал литовскому языку и культуре прусских литовцев. Несколько факторов поспособствовали национальному движению: на литовский язык обратили внимание учёные-лингвисты; после отмены крепостного права в Российской империи в 1861 году, социальная мобильность увеличилась, и появился класс литовской интеллигенции, происходивший из литовского села. В католической церкви были ослаблены барьеры, которые ранее мешали простолюдинам во время богослужений. Более тесные отношения сложились между священниками-литовцами и прихожанами, их объединяло желание использовать литовский язык. Складывающееся национальное движение стремилось дистанцироваться от польских и российских влияний, и использование литовского языка рассматривалось как важный аспект этого движения.


title: Литовское национальное пробуждение

text: Развитие литовской национальной культуры и национальной идентичности затруднялось запретом на литовскую латиницу и запретом литовских газет. Это была одна из репрессивных мер, которая последовала после восстания 1863 года. Тем не менее, печать книг на литовском языке продолжалась за пределами Российской империи. Национальное движение началось среди студентов и молодёжи, которые обучались в университетах Российской империи и иностранных государств. Многие из них были сыновьями богатых фермеров, и, таким образом, придя из крестьянского сословия, были менее затронуты полонизацией. Началась публикация литовских газет Аушра и Варпас, а затем публикация стихов и книг на литовском. Выпускались в США и Восточной Пруссии, в Литву ввозились контрабандой. Произведения романтизировали прошлое Великого княжества Литовского, изображая его как великую державу со многими героями. С литовским национальным движением началось и движение за независимость, с различными организациями против русификации и российского влияния. Политика российских властей в ответ стала жёстче, и значительная часть католических церквей была преобразована в православные храмы, запрет на литовскую печать продолжался. Тем не менее, даже с цензурой газет грамотность литовцев продолжала увеличиваться. Процентная доля грамотности литовцев была одной из самых высоких, по сравнению с другими народами Российской империи, уступая лишь финнам, эстонцам и латышам. К концу XIX века сформировалась современная литовская нация. Политические требования были высказаны на Великом Вильнюсском сейме, цензура литовских газет была отменена в 1904 году.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Иван Варламович Рехлов (23 октября 1910 года, село Листвягово, Енисейская губерния — 6 декабря 1985 года, Шушенское, Красноярский край) — рабочий, коллекционер. Создатель Шушенской картинной галереи. Заслуженный работник культуры РСФСР(1970 год). Почетный гражданин Шушенского.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Родился в селе Листвягово Енисейской губернии. Мать умерла после родов, с двухлетнего возраста ребенка воспитывал состоятельный сосед Андриан Федотович Марьясов. В период коллективизации, потеряв приемного отца, поехал в Шира, затем — в Минусинск. В 1938 году по комсомольскому призыву отправился на Таймыр. Работал на почте, в продмаге оленеводческого совхоза, был комсоргом в Усть-Порту. В период Великой Отечественной войны организовывал снабжение продовольствием рабочих Норильского комбината через Диксон и мыс Входной. После войны трудился на Норильском металлургическом заводе рабочим-дробильщиком руды, занимался профсоюзной работой. Увлекался коллекционированием репродукций картин, книг и альбомов, организовывал выставки во многих городах России и за рубежом.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: После выхода на пенсию с 1969 года проживал в Шушенском, возглавлял Шушенскую народную картинную галерею.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Начал собирать репродукции с картин известных художников в середине 1930-х годов. Первым приобретением стала открытка с картины художника А. Герасимова «Ленин на трибуне», которую молодой служащий почты купил в книжном магазине Минусинска. Затем появились факсимильные репродукции всемирно известных мастеров живописи и подлинные работы советских художников, приобретённые на собственные средства.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Проводил выставки репродукций из своего собрания в общежитиях, библиотеках, на предприятиях. Первую большую выставку в Норильске организовал в 1956 году. В 1962-1963 годах были организованы первые художественные выставки из его коллекции за рубежом — в Лейпциге, Дрездене, Берлине, их принимали в культурных центрах Румынии, Венгрии, Чехословакии, Польши. Имя рабочего из Норильска значилось в списках коллекционеров крупнейших музеев и галерей Европы, Азии и Америки, с ним вели переписку Вильгельм Пик, Вальтер Ульбрихт, Пальмиро Тольятти, Янош Кадар.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Значительную часть коллекции составляла художественная лениниана, поэтому, выйдя на пенсию, выбрал местом жительства Шушенское. 21 мая 1970 года состоялось постановление Президиума Красноярского краевого Совета профсоюзов о создании в Шушенском народной картинной галереи и утверждении директором галереи Ивана Варламовича Рехлова. В этом же году ему было присвоено звание «Заслуженный работник культуры РСФСР».


title: Рехлов, Иван Варламович

text: С 1973 года в течение четверти века директором галереи была невестка И. В. Рехлова Лилия Михайловна Рудакова (1931—1998 гг.). После её кончины органами культуры Красноярского края коллекция была выкуплена у родственников и передана в музей-заповедник «Шушенское».


title: Рехлов, Иван Варламович

text: Собрание насчитывает около двадцати тысяч произведений живописи, графики, скульптуры одной тысячи двухсот российских и зарубежных авторов.


title: Рехлов, Иван Варламович

text: С 2010 года в Шушенском проводятся «Рехловские чтения».


title: Корейский меч

text: Корейский меч — меч, произведённый на территории Корейского полуострова. Отличительной особенностью корейских мечей являются приспособленность к ношению в руке (а не на поясе) режущим краем вниз, тогда как японский меч носят на поясе режущим краем вверх


title: Корейский меч

text: Корейское кузнечное дело развивалось в условиях контактов с соседними странами, обогащая искусство изготовления мечей. В доисторическую эпоху японские и корейские изготовители мечей обменивались опытом; после завоевания страны монголами монгольские кузнечные традиции были переняты корейцами.


title: Корейский меч

text: Длинные мечи эпохи Трёх корейских государств использовались преимущественно кавалерией и командующими (которые также передвигались верхом), а не пехотой. В это время наземные войска состояли в основном из пеших копейщиков и лучников, конных лучников, конных мечников, вооружёных двумя мечами. Мечи не были основным оружием во время битвы, а использовались для неожиданных атак, оборонительных маневров и ближнего боя. Клинки были тяжёлыми, так как изготовлялись из бронзы, а позднее из железа, часто снабжались навершиями. Короткие мечи использовались бронированными пехотинцами в.


title: Корейский меч

text: К последней трети периода Трех Королевств Кореи (с 450 года н. э.), технология изготовления стали пришла из Китая (возможно в период Южных и Северных Династий) и была принята на вооружение во всех трёх королевствах (Когурё, Пэкче и Силла).


title: Корейский меч

text: В период династии Корё некоторое количество корейских мечей были экспортированы торговыми миссиями в Азии.


title: Корейский меч

text: Существует 15 разновидностей корейских мечей, некоторые из них более известны, чем другие.


title: Корейский меч

text: В понятие «меч» входят также:


title: Корейский меч

text: Существуют деревянные мечи (мокком), металлические мечи, незаточенные тренировочные мечи (каком) и стальные мечи односторонней заточки с долом — чинком .


title: Быково (Лотошинский район)

text: Быко́во — деревня в Лотошинском районе Московской области России.


title: Быково (Лотошинский район)

text: Относится к сельскому поселению Микулинское, до реформы 2006 года относилась к Микулинскому сельскому округу. По данным Всероссийской переписи 2010 года численность постоянного населения составила 4 человека (1 мужчина, 3 женщины). Код ОКТМО — .


title: Быково (Лотошинский район)

text: Расположена в северо-западной части сельского поселения, примерно в 23 км к северо-западу от районного центра — посёлка городского типа Лотошино, на левом берегу небольшой реки Боровки, впадающей в Шошу. Соседние населённые пункты — деревни Боровки, Коноплёво и Речки.