title: Isabel de Baviera

text: Perteneciente a la Casa de Wittelsbach, nacida con la dignidad de duquesa en Baviera y tratamiento de "Alteza Real", era hija del duque Maximiliano de Baviera y de la princesa real Ludovica de Baviera.


title: Isabel de Baviera

text: Isabel nació en la ciudad de Múnich, Baviera. Su padre, Maximiliano de Baviera, duque en Baviera, procedía de una rama menor de la Casa de Wittelsbach, la de Condes Palatinos de Zweibrücken-Birkenfeld-Gelnhausen, en ese momento "Duque en Baviera". En cambio su madre, Ludovica de Baviera, era hija del rey Maximiliano I de Baviera y, por tanto, princesa real de Baviera.


title: Isabel de Baviera

text: Educada, como sus hermanos, lejos de la Corte de Baviera, pasó la mayor parte de su infancia a caballo entre su ciudad natal y los salvajes parajes que rodeaban al castillo de Possenhofen, a orillas del lago de Starnberg, que su padre había adquirido para residencia de verano y que pronto se convirtió en la residencia preferida por la familia ducal.


title: Isabel de Baviera

text: En agosto de 1853, a los 15 años, Isabel acompañó a su madre y a su hermana mayor, Elena de Baviera, a quien familiarmente apodaban "Nené", en un viaje a la residencia de verano de la Familia Real de Austria, situada en Bad Ischl, donde esperaba la archiduquesa Sofía de Baviera, hermana de Ludovica, junto a su hijo, el emperador de Austria, Francisco José I. Tal encuentro estaba preparado para que el emperador se fijase en Elena y la tomase como prometida. Sin embargo, Francisco José, de 23 años, se sintió inmediatamente atraído por Isabel, lo que trastocó los planes que madre y tía tenían para ellos. Todos los esfuerzos para hacer desistir al emperador de la idea de casarse con su prima fueron vanos. El mismo Francisco José escribió a Alberto de Teschen, su primo, que estaba «enamorado como un cadete».


title: Isabel de Baviera

text: Un año después del primer encuentro, Isabel contrajo matrimonio con su primo, el emperador de Austria, el 24 de abril de 1854 en la Iglesia de los Agustinos de Viena, y se convirtió así en emperatriz.


title: Isabel de Baviera

text: Isabel tuvo desde el principio grandes dificultades para adaptarse a la estricta etiqueta que se practicaba en la corte imperial de Viena. Aun así, le dio al emperador cuatro hijos:En una visita a Hungría en 1857, Isabel se empeñó en llevar consigo a las archiduquesas Sofía y Gisela, a pesar de la rotunda negativa de su suegra, la archiduquesa Sofía. Durante el viaje, las niñas enfermaron gravemente, padeciendo altas fiebres y graves ataques de diarrea. Mientras que la pequeña Gisela se recuperaba rápidamente, su hermana no tuvo la misma suerte y falleció, seguramente deshidratada. Su muerte, que sumió a Isabel en una profunda depresión que marcaría su carácter para el resto de su vida, propició que le fuese denegado el derecho sobre la crianza del resto de sus hijos, que quedaron a cargo de su suegra, la archiduquesa Sofía. Tras el nacimiento del príncipe Rodolfo, la relación entre Isabel y Francisco José comenzó a enfriarse.


title: Isabel de Baviera

text: Isabel, por su parte, solo pudo criar a su última hija, María Valeria, a la que ella misma llamaba cariñosamente «mi hija húngara», dado el gran aprecio que le tenía al país de Hungría, lugar donde habitualmente se refugiaba y en cuya cultura y costumbres se empeñó en educarla. Los grandes enemigos que Isabel hizo en la Corte austriaca la llamaban despectivamente «la niña húngara» y no por el amor que su madre profesaba por tal país, sino porque creían que la niña era fruto en realidad de algún escarceo que Isabel habría mantenido con el conde húngaro Gyula Andrássy. No obstante, el gran parecido que Valeria guardaba con su padre, el emperador, se encargó de desmentir tales rumores.


title: Isabel de Baviera

text: Dotada de una gran belleza física, Isabel se caracterizó por ser una persona rebelde, culta y demasiado avanzada para su tiempo. Adoraba la equitación y llegó a participar en muchos torneos. Sentía un gran aprecio por los animales; amaba a sus perros, costumbre heredada de su madre, hasta el punto de pasear con ellos por los salones de palacio. Le gustaban los papagayos y los animales exóticos en general. Incluso llegó a tener su propia pista circense en los jardines de su palacio en Corfú.


title: Isabel de Baviera

text: Hablaba varios idiomas: el alemán, el inglés, el francés, el húngaro, propiciado por su interés e identificación con la causa húngara, y el griego, este último aprendido con ahínco para poder disfrutar de las obras clásicas en su idioma original. Cuidaba su figura de una forma maniática, llegando a hacerse instalar unas anillas en sus habitaciones para poder practicar deporte sin ser vista, además de utilizar espalderas para sus ejercicios gimnásticos. Además, mantuvo su cabellera siempre larga y perfectamente cuidada. Su peluquera, Fanny Angerer, dedicaba por lo menos dos horas cada día a ocuparse de ella, lavándola con una mezcla de huevo y coñac. Su alimentación dio también mucho que hablar, pues se alimentaba básicamente a base de pescado hervido, alguna fruta y zumo de carne exprimida. A partir de los 35 años no volvió a dejar que nadie la retratase o le tomase una fotografía; para ello, adoptó la costumbre de llevar siempre un velo azul, una sombrilla y un gran abanico de cuero negro con el que se cubría la cara cuando alguien se acercaba demasiado a ella. Paseaba a diario durante ocho largas horas, llegando a extenuar a varias de las damas de su séquito, entre ellas las húngaras Ida Ferenczy y la condesa Maria Festetics. Además, adoraba viajar, y nunca permanecía en el mismo lugar más de dos semanas. La condesa Maria Festetics acompañó a la emperatriz en 33 de sus viajes al extranjero, siempre velando estrictamente por su seguridad personal, y fue su más leal servidora y estrecha confidente. Disfrutó de la literatura, en especial de las obras de William Shakespeare, de Friedrich Hegel y de su poeta predilecto, Heinrich Heine.


title: Isabel de Baviera

text: Detestaba el aparatoso protocolo de la corte imperial de Viena, radicalmente diferente del ambiente en el que se había criado. Sus damas de compañía, de edad mucho mayor que la suya y elegidas entre las grandes familias de la aristocracia, eran extremadamente conservadoras. De hecho, procuró participar lo menos posible de la vida en la corte y terminó desarrollando una auténtica fobia contra ella que le provocaba trastornos psicosomáticos, como cefaleas, náuseas y depresión nerviosa. También se mantuvo en lo posible alejada de la vida pública. De hecho, al poco tiempo de casarse, Sissi expresó en un poema su decepción con el enclaustramiento que sufría dentro del palacio imperial: Fue una emperatriz ausente de su imperio, aunque no por ello menos pendiente de los asuntos de Estado.


title: Isabel de Baviera

text: Tras haber usado cualquier excusa para evitar un posible embarazo, Isabel decidió que quería un cuarto hijo. Esta decisión no fue solo una deliberada elección personal, sino también una negociación política. De esta manera, se aseguraba que Hungría, con la cual ella sentía una intensa relación emocional, ganaría la misma posición que Austria.


title: Isabel de Baviera

text: El compromiso austro-húngaro de 1867 creó la monarquía dual entre Austria y Hungría. Andrassy se convirtió en el primer ministro húngaro y en recompensa coronó a Francisco José y a Isabel como rey y reina de Hungría en junio.


title: Isabel de Baviera

text: Como regalo de coronación, se le otorgó a la pareja real una residencia en Gödöllő, a 32 kilómetros al noreste de Budapest. Durante el año siguiente, Isabel vivió principalmente en Gödöllő y en Budapest, dejando sus descuidadas y resentidas tareas de Austria, para hacer circular rumores sobre el hijo que estaba esperando. Si este era varón lo llamaría Esteban, en honor al primer rey de Hungría. Sin embargo, dio a luz a una hija, a la que pusieron por nombre María Valeria (1868-1924), la cual Isabel consideraba su "hija húngara". Nació diez meses después de la coronación de los emperadores y fue bautizada en Hungría, en abril.


title: Isabel de Baviera

text: En esta ocasión, Isabel consiguió criar a su hija por sí misma. Depositó todo su reprimido instinto maternal en su hija más pequeña hasta el punto de sofocarla. La influencia de la archiduquesa Sofía sobre los hijos de Isabel y la Corte terminó con su muerte en 1872.


title: Isabel de Baviera

text: En 1889, la vida de la emperatriz cambiaría radicalmente a causa de la muerte de su único hijo y de las circunstancias en que ocurrió. El príncipe Rodolfo, de 30 años, que padecía ciertos trastornos psicológicos causados en parte por la estricta educación militar a la que fue sometido en su infancia, convenció a su amante, la joven baronesa María Vetsera, para que se quitase la vida junto a él. Sin embargo, se habló, y aún hoy en día se habla, de un complot contra Rodolfo. Por un lado, existe la hipótesis de un complot tejido por los servicios secretos austríacos, dadas las ideas radicales y liberales que el hijo del emperador profesaba. Por otro lado, la hipótesis de un complot urdido por los servicios secretos franceses ante la negativa de Rodolfo a dar un golpe a la política de su padre. Todo esto se fundamenta en los estudios sobre los cuerpos de los fallecidos. Ella, según dichos estudios, no murió de un disparo en la cabeza, sino de una paliza previa. Él presentaba cortes en la cara y en varias partes del cuerpo, algo impropio de un suicidio, que se taparon con maquillaje antes de su funeral en Viena. A pesar de las hipótesis, la causa de su muerte es, al día de hoy, una incógnita.


title: Isabel de Baviera

text: Este episodio, que se conoce como «Crimen de Mayerling» por ser Mayerling el nombre del refugio de caza donde ocurrió la tragedia, dejó también marcado al emperador, quien de la noche a la mañana se encontró sin un heredero que se hiciese cargo del vasto imperio austrohúngaro.


title: Isabel de Baviera

text: Tras la muerte de su hijo, la emperatriz abandonó Viena y adoptó el negro como único color para su vestimenta, a la vez que se incrementó su fobia a ser retratada. Solo unas pocas fotografías se conservan, de fotógrafos con suerte que lograron captarla sin que ella lo advirtiera. Con el tiempo se hizo extraño que la emperatriz visitase a su marido en Viena, pero, curiosamente, su correspondencia aumentó de frecuencia durante los últimos años, y la relación entre los esposos se fue convirtiendo en platónica y cariñosa.


title: Isabel de Baviera

text: Esta última etapa en la vida de la emperatriz estuvo marcada más que nunca por sus viajes. Compró un barco de vapor al que llamó "Miramar" y en él recorrió el mar Mediterráneo. Uno de sus lugares favoritos fue Cap Martin, en la Riviera francesa, donde el turismo se había hecho constante a partir de la segunda mitad del siglo XIX. También pasaría algunas temporadas de verano en el lago de Ginebra en Suiza, en Bad Ischl, en Austria, y en Corfú, donde construyó su palacio, el "Achilleion", en honor de Aquiles, uno de sus héroes griegos preferidos. Dedicó largas temporadas en estos años a aprender griego, con ayuda de un joven profesor particular, Constantin Christomanos. Además, visitó otros países como Portugal, España, Marruecos, Argelia, Malta, Grecia, Turquía y Egipto.


title: Isabel de Baviera

text: El 10 de septiembre de 1898, mientras paseaba por el lago Lemán de Ginebra con una de sus damas de compañía, la condesa húngara Irma Sztaray, fue atacada por un anarquista italiano, Luigi Lucheni, quien fingió tropezarse con ellas y aprovechó el desconcierto para deslizar un fino estilete en el corazón de la emperatriz. La seguridad personal de la emperatriz por lo general se hallaba confiada a la otra condesa húngara Maria Festetics, quien ya a su avanzada edad y con su salud debilitada había sido forzada a tomar una pausa. Por eso, en su lugar, en este viaje a Ginebra acompañó a la emperatriz una dama de compañía mucho más joven, Irma Sztaray. Al principio, Isabel no fue consciente de lo que había sucedido. Solamente al subir al barco que las estaba esperando comenzó a sentirse mal y a marearse. Cuando se desvaneció, su dama de compañía avisó al capitán del barco de la identidad de la dama y regresaron al puerto. Ella misma desabrochó el vestido de la emperatriz para que respirara mejor y, al hacerlo, vio una pequeña mancha de sangre sobre el pecho causada por el estilete, que había provocado una pérdida de sangre que le ocasionó un taponamiento cardíaco que le causó la muerte.


title: Isabel de Baviera

text: Luigi Lucheni estaba en realidad planeando un atentado contra el pretendiente al trono francés, un príncipe de la Casa de Orleans, pero cambió de víctima al leer en un periódico que la visita del príncipe francés se había cancelado y que la emperatriz austríaca se encontraba en la ciudad. El cuerpo de la emperatriz fue trasladado a Viena entre el gran cortejo fúnebre que el protocolo dictaba, y fue sepultada en la Cripta Imperial o "Kaisergruft", en la iglesia de los Capuchinos, en vez de en su palacio en la isla griega de Corfú, el "Achilleion", donde deseaba recibir sepultura realmente, tal como indicó en su testamento. Junto a su sepulcro se encuentra el de su esposo y el de su hijo Rodolfo.Su imagen es actualmente un icono turístico de Austria; así, en el palacio Hofburg de Viena, que ella tanto detestaba, hay actualmente un museo en su honor. También es un icono turístico bávaro, región de origen de Isabel, con un museo en su localidad natal, Possenhofen. Uno de los valses más famosos de Johann Strauss, que lleva el nombre de "Myrthen-Kränze Walzer, Op.154", se estrenó en un cumpleaños de la soberana y ha pasado a la posteridad como una gran obra musical decimonónica.


title: Isabel de Baviera

text: En su visita a la provincia de Alicante en 1894 estuvo en Alicante y Elche, y allí, al ver la famosa palmera de siete brazos del Palmeral, exclamó que era digna de un imperio, por lo que recibió el nombre de "Palmera Imperial". La escritora española Ángeles Caso ha escrito varios libros sobre la emperatriz, intentando desmitificar la imagen edulcorada e infantil que de ella se dio en el cine, aunque basándose en la primera gran biografía realista sobre la emperatriz, de la escritora e historiadora germano-austríaca Brigitte Hamann, Existen además numerosas publicaciones sobre su vida en varios idiomas.


title: Isabel de Baviera

text: Es un personaje histórico muy conocido gracias al cine por la trilogía de películas austro-alemanas de los años 1950: "Sissí", "Sissí Emperatriz" y "El destino de Sissí", todas protagonizadas por la bella actriz vienesa Romy Schneider. Esta volvería a encarnar el personaje en la película "Ludwig II" (1972) de Luchino Visconti. No obstante, la primera aparición cinematográfica sería en 1932 cuando la realizadora alemana Lotte Reiniger hizo un cortometraje sobre la emperatriz. También fue interpretada por Ava Gardner en "Mayerling" (1968).


title: Isabel de Baviera

text: La editorial Bruguera publicó en 1958 la revista para niñas "Sissi", buscando rentabilizar el éxito del personaje cinematográfico.


title: Isabel de Baviera

text: En 1998, con motivo del centenario de su muerte, se estrenó en Viena el musical "Elisabeth", el cual se ha traducido a siete idiomas y estrenado en países como Alemania, Finlandia, Japón, Hungría, Países Bajos y Suecia. Sin lugar a dudas, el mayor éxito se ha dado en Japón, donde diferentes compañías del teatro Takarazuka lo llevan representando desde 1996 hasta la actualidad. También se estrenó en 2012 en Corea del Sur contando con la participación de la estrella Xiah Junsu, con gran éxito y acogida.


title: Isabel de Baviera

text: En la serie austriaca "Rex, un policía diferente", hubo un episodio titulado "Sissi", sobre una asesina que pretendía mimetizarse con ella.


title: Herencia biológica

text: La herencia biológica es el proceso por el cual la descendencia de una célula u organismo adquiere o está predispuesta a adquirir las características (físicas, fisiológicas, morfológicas, bioquímicas o conductuales) de sus progenitores. Esas características pueden transmitirse a la generación siguiente o dar un salto y aparecer dos o más generaciones después.


title: Herencia biológica

text: Es lo que se conoce como genética, que incluye:El primero Estos factores, además, pueden sufrir cambios que son transmitidos a la descendencia, lo que da lugar a la aparición de variabilidad dentro de un mismo rasgo para individuos de una misma especie.


title: Herencia biológica

text: Estos cambios se producen debido a:Aunque hoy día la palabra "gen" presenta múltiples significados, suele utilizarse para referirse a los factores hereditarios.


title: Depurador

text: Un depurador (en inglés: "debugger") es un programa usado para probar y depurar (eliminar) los errores de otros programas (el programa "objetivo"). El código a ser examinado puede alternativamente estar corriendo en un simulador de conjunto de instrucciones (ISS), una técnica que permite gran potencia en su capacidad de detenerse cuando son encontradas condiciones específicas pero será típicamente algo más lento que ejecutando el código directamente en el apropiado (o el mismo) procesador. Algunos depuradores ofrecen dos modos de operación, la simulación parcial o completa, para limitar este impacto.


title: Depurador

text: Si es un depurador de nivel de fuente o depurador simbólico, comúnmente ahora visto en entornos de desarrollo integrados, cuando el programa "se estrella" o alcanza una condición predefinida, la depuración típicamente muestra la posición en el código original. Si es un depurador de bajo nivel o un depurador de lenguaje de máquina, muestra la línea en el fuente desensamblado (a menos que también tenga acceso en línea al código fuente original y pueda exhibir la sección apropiada del código del ensamblador o del compilador). Un "estrellamiento" sucede cuando el programa no puede continuar normalmente debido a un error de programación. Por ejemplo, el programa pudo haber intentado usar una instrucción no disponible en la versión actual del CPU o haber intentado tener acceso a memoria protegida o no disponible.


title: Depurador

text: Típicamente, los depuradores también ofrecen funciones más sofisticadas tales como correr un programa paso a paso (un paso o animación del programa), parar el programa (breaking), es decir, pausar el programa para examinar el estado actual en cierto evento o instrucción especificada por medio de un breakpoint, y el seguimiento de valores de algunas variables. Algunos depuradores tienen la capacidad de modificar el estado del programa mientras que está corriendo, en vez de simplemente observarlo. También es posible continuar la ejecución en una posición diferente en el programa bypaseando un estrellamiento o error lógico.


title: Depurador

text: La importancia de un buen depurador no puede ser exagerada. De hecho, la existencia y la calidad de tal herramienta para un lenguaje y una plataforma dadas a menudo puede ser el factor de decisión en su uso, incluso si otro lenguaje/plataforma es más adecuado para la tarea. La ausencia de un depurador, una vez estando acostumbrado a usar uno, se ha dicho que "hace que usted se sienta como un hombre ciego en un cuarto oscuro buscando un gato negro que no está allí". Sin embargo, el software puede (y a menudo) se comporta diferentemente corriendo bajo un depurador que normalmente, debido a los cambios inevitables que la presencia de un depurador hará a la temporización interna de un programa de software. Como resultado, incluso con una buena herramienta de depuración, es a menudo muy difícil rastrear problemas de tiempo de corrida en complejos sistemas distribuidos con múltiples hilos.


title: Depurador

text: La misma funcionalidad que hace a un depurador útil para eliminar errores permite ser usado como herramienta de craqueo de software para evadir la protección anticopia, la gestión digital de derechos, y otras características de protección de software. A menudo también lo hace útil como herramienta general de verificación de pruebas, cobertura de fallas, o analizador de desempeño, especialmente si son mostradas las longitudes de trayectoria de instrucción.


title: Depurador

text: La mayoría de los motores de depuración actuales, tales como gdb y dbx proporcionan interfaces basadas en línea de comandos. Los frontales de depuración son extensiones populares a los motores de depuración, que proporcionan integración al IDE, animación del programa, y características de visualización. Algunos depuradores de los primeros mainframes tales como el Oliver y el SIMON proporcionaron esta misma funcionalidad para el IBM System/360 y posteriores sistemas operativos, hasta los años 1970.


title: Depurador

text: Algunos depuradores operan en un simple lenguaje específico mientras que otros pueden manejar múltiples lenguajes transparentemente. Por ejemplo si el programa objetivo principal es escrito en COBOL, pero llama a subrutinas en assembler y también subrutinas en PL/1, el depurador puede cambiar modos dinámicamente para acomodar los cambios en el lenguaje a medida que ocurren.


title: Depurador

text: Algunos depuradores también incorporan protección de memoria para evitar violaciones del almacenamiento tales como desbordamiento de búfer. Esto puede ser extremadamente importante en los ambientes de procesamiento de transacciones donde la memoria es dinámicamente asignada desde "pools" de memoria en una base de tarea por tarea.


title: Depurador

text: La mayoría de los microprocesadores modernos tienen al menos una de estas características en su diseño de CPU para hacer la depuración más fácil:El depurador lanza el programa a depurar. Este se ejecuta normalmente hasta que el depurador detiene su ejecución, permitiendo al usuario examinar la situación.


title: Depurador

text: El depurador permite detener el programa en:


title: Depurador

text: Durante esa interrupción, el usuario puede:


title: Depurador

text: El depurador depende de la arquitectura y sistema en el que se ejecute, por lo que sus funcionalidades cambian de un sistema a otro. Aquí se han mostrado las más comunes.


title: Depurador

text: Para poder aprovechar todas las posibilidades de depuración es necesario que, al compilar el programa a depurar, se indique al compilador que debe incluir instrucciones e información extra para la depuración del código. Dicha información extra consiste básicamente en la correspondencia entre las instrucciones del código ejecutable y las instrucciones del código fuente que las originan, así como información sobre nombres de variables y funciones.


title: Depurador

text: Aun si no se incluye esta información de depuración, sigue siendo posible monitorizar la ejecución del programa. Sin embargo, resultará más difícil y compleja debido a esa falta de información del contexto en el que se ejecuta el programa.


title: Depurador

text: Un depurador también puede usarse para realizar ingeniería inversa o evitar protecciones de copia. Mediante el uso del depurador se puede conocer el funcionamiento interno del programa examinado, ayudando al proceso de ingeniería inversa o permitiendo desarrollar técnicas para evadir las restricciones impuestas por el programa.


title: Depurador

text: Es importante notar que un programa que está siendo depurado puede presentar un comportamiento diferente a si se ejecuta en solitario debido a que el depurador cambia ligeramente los tiempos internos del programa. Estos cambios en los tiempos de ejecución afectan especialmente a complejos sistemas distribuidos.


title: SiRNA

text: siRNA son las siglas en inglés de "small interfering RNA", en español ARN pequeño de interferencia (ARNpi) o ARN de silenciamiento, una clase de ARN bicatenario. Es un tipo de ARN interferente con una longitud de 20 a 25 nucleótidos que es altamente específico para la secuencia de nucleótidos de su ARN mensajero diana, interfiriendo por ello con la expresión del gen respectivo. Interviene en el mecanismo denominado interferencia de ARN ("RNA interference", RNAi), donde el siRNA interfiere con la expresión de un gen específico, reduciéndola. Además, los siRNAs también actúan en otras rutas relacionadas con el RNAi, como en la defensa antiviral o en la organización de la estructura de la cromatina en un genoma. La complejidad de estas rutas es el objeto de intensos estudios, y su descubrimiento fue la razón por la cual Craig C. Mello y Andrew Fire recibieron el Premio Nobel de Fisiología o Medicina 2006. Los siRNAs son moléculas de ARN doble hebra de 20-25 nucleótidos (nt) perfectamente complementarias, que se originan a partir de un ARN largo de doble hebra ("dsRNA, double strand RNA"). Los dsRNAs pueden ser de origen endógeno (por ejemplo los tránscritos generados a partir de secuencias de ADN repetidas en tándem), o de origen exógeno (como virus o transgenes). La enzima responsable del procesamiento del dsRNA en moléculas de siRNAs es Dicer, una enzima citoplásmica de la familia ARNasa III, que procesa el dsRNA en fragmentos de ARN doble hebra con extremos 5' fosfato y 2 nucleótidos libres con extremo hidroxilo (-OH) en 3'.


title: SiRNA

text: Los siRNAs suprimen la expresión de los genes diana mediante el corte del ARN mensajero (ARNm) complementario en dos mitades, a través de la interacción de la hebra antisentido del siRNA con el complejo RISC ("RNA-induced silencing complex"). Las dos mitades del ARNm son posteriormente degradadas por la maquinaria celular, lo que conlleva la supresión de la expresión del gen.


title: SiRNA

text: Por otro lado, los siRNAs promueven la modificación del ADN, facilitando el silenciamiento de la cromatina, puesto que favorecen la expansión de los segmentos de heterocromatina, a través del complejo RITS ("RNA-induced transcriptional silencing").


title: SiRNA

text: El mecanismo de interferencia de ARN (RNAi) se observó por primera vez en plantas como parte del silenciamiento post-transcripcional de genes (PTGS). Investigadores que trataban de introducir transgenes en petunias para conseguir flores de un color violeta más intenso, obtuvieron flores con zonas blancas, lo que indicaba que tanto los transgenes introducidos como los genes endógenos habían sido silenciados. Este efecto se denominó co-supresión, y se observó que podía inducirse por:


title: SiRNA

text: Por esta razón, se supuso que este era un mecanismo de defensa en las plantas, de forma que estas responden a la infección de los retrovirus mediante la destrucción de los ARN virales. Sin embargo, el mecanismo de acción era desconocido.


title: SiRNA

text: Por otro lado, los investigadores que trabajaban en la década de los 90 en el gusano "C. elegans", inyectaban ARN-antisense en las gónadas del gusano para tratar de interferir con la expresión de los genes, puesto que pensaban que el ARN-antisense se aparearía con el ARNm (sense), evitando de esta forma la traducción del ARNm y suprimiendo la expresión del gen objetivo. Sin embargo, Guo y Kemphues, observaron que la inyección de ARN-sense en el gusano era igualmente eficaz que el ARN-antisense para la supresión de la expresión génica. Pero no podían explicar por qué razón.


title: SiRNA

text: En 1998, Andrew Fire, Craig C. Mello y colaboradores publicaron un trabajo en Nature, en el cual indicaban que, si inyectaban solo ARN de hebra simple en el gusano, tanto sense como antisense, no se observaba ningún efecto. Sin embargo, si inyectaban ARN doble hebra (dsRNA), observaban la supresión específica del gen objetivo. Esto puede parecer contradictorio con los resultados de Guo y Kemphues, pero estos inyectaron ARN de hebra simple (sense o antisense) que no había sido purificado, de forma que en el proceso de producción se producen segmentos de doble hebra, que son los que generan la supresión observada por Guo y Kemphues. Sin embargo, Fire y Mello utilizaron ARN purificado, que no contiene dsRNA y por tanto es inactivo. Cuando las hebras sense y antisense se aparean para producir dsRNA, el efecto de supresión es 100 veces mayor al observado con las hebras simples por separado.


title: SiRNA

text: Asimismo, en el mismo reporte, Fire y Mello establecieron que la interferencia de la expresión del gen objetivo se produce a nivel del ARNm: cuando inyectaron en gusanos dsRNA contra el gen mex-3, detectaron que el ARNm de mex-3 desaparece, y por tanto los gusanos no son viables. Sin embargo, cuando inyectaban ARN de hebra simple (sense o antisense) contra mex-3, la mayor parte del ARNm de mex-3 permanecía intacto, y por ello no se observa fenotipo.


title: SiRNA

text: Igualmente, también establecieron que el efecto de supresión solo ocurre si el dsRNA que se introduce en el gusano es complementaria de una región codificante (exones), pero no si es complementaria de una región no codificante (intrones o el promotor). Esto indica que la interferencia se produce a nivel del ARNm, cuando ya se han eliminado los intrones del pre-ARNm, y por tanto es un mecanismo post-transcripcional.


title: SiRNA

text: Inicialmente los dsRNAs se inyectaban en las gónadas de los gusanos, pero también pueden ser inyectados en el intestino o en la cabeza. Incluso se observa efecto cuando los gusanos son alimentados con cepas de "E. coli" portadoras de un plásmido a partir del cual se transcribe el dsRNA. En este caso el efecto es un poco más débil, pero todavía evidente. En todos los casos el efecto sobre la expresión del gen diana se observa no solo en el tejido inyectado, sino en la mayoría de los tejidos, lo que indica que la señal puede transmitirse de una célula a otra.


title: SiRNA

text: Una vez que estuvo claro que el mecanismo de RNAi actúa directamente sobre el ARNm, permanecía una importante cuestión: ¿qué es lo que causaba la degradación del ARNm? Los experimentos descritos a continuación explican cómo se descubrieron los siRNAs.


title: SiRNA

text: Para explicar la co-supresión observada en plantas, se propuso la existencia de ARNs anti-sense, que mediante apareamiento de bases con el ARNm diana, de alguna manera promoverían la degradación del ARNm o interferirían con la traducción del mismo. Sin embargo, en las células afectadas no se detectaron ARNs anti-sense que tuvieran el tamaño de los ARNm, de manera que los investigadores analizaron si en las plantas transgénicas afectadas aparecían moléculas de ARN de menor tamaño.


title: SiRNA

text: En uno de estos experimentos, realizado por Hamilton y Baulcombe en 1999, se analizó la presencia de pequeños ARNs en cinco líneas de plantas de tomate, que habían sido transformadas con un plásmido que codificaba para ACO ("aminocyclopropane-carboxylate oxidase"). En dos de las líneas analizadas la expresión del ARNm de ACO había sido suprimida, y consecuentemente el ARNm no se detectaba en Northern blots. Para detectar la posible presencia de ARN pequeños se utilizaron geles de Northern blot con mayor concentración de poliacrilamida, utilizando como sonda tránscritos sense o anti-sense. Sólo en las plantas en las que la expresión de ACO había sido suprimida se detectaron ARNs de aproximadamente 25 nt con ambas sondas, pero no se detectaron en las plantas en las que el ARNm de ACO estaba aún presente. Por tanto, se demostró la presencia de los pequeños ARN propuestos, en plantas en las que la expresión de ACO estaba afectada. Con experimentos similares se demostró que plantas infectadas con virus también contienen pequeños ARNs con secuencias virales.


title: SiRNA

text: Es importante notar que estos pequeños ARNs no son productos de la degradación del ARNm, porque se encontraron no sólo moléculas sense, sino también anti-sense.


title: SiRNA

text: Para estudiar en más profundidad el mecanismo de RNAi, se utilizaron sistemas "in vitro". En 2000, Phil Zamore, Tom Tuschl y colaboradores desarrollaron un sistema "in vitro" para estudiar embriones de Drosophila. El grupo de Greg Hannon desarrolló otro sistema "in vitro", utilizando extractos de células de Drosophila en cultivo.


title: SiRNA

text: Zamore, Tuschl y colaboradores fueron los primeros en mostrar que el ARNm incubado en un extracto se degrada en presencia de dsRNA. Para ello, añadieron al extracto dos ARNm modelo que codifican para proteínas luciferasa de 2 especies diferentes (Drosophila no codifica la proteína luciferasa). Cuando se añadió al extracto dsRNA contra el ARNm de luciferasa, el ARNm fue degradado eficientemente. Cuando se añadió ARN antisense, sólo se degradó una pequeña cantidad del ARNm, y la adición de tampón únicamente (control negativo) no produjo ningún efecto. Estos resultados son similares a los obtenidos en los experimentos "in vivo" con "C.elegans", donde se demostró que los dsRNAs son mucho más eficientes que el ARN antisense en la producción de un efecto de RNAi.


title: SiRNA

text: En otro experimento, Zamore, Tuschl y colaboradores comprobaron si los dsRNAs son procesados en pequeños fragmentos de ~25 nt (como ocurre en plantas). En este experimento, dsRNAs marcados radiactivamente bien en la hebra sense, en la antisense o en las dos, se incubaron en los extractos de Drosophila en presencia o ausencia de ARNm. Cuando los dsRNA se incubaron en el extracto, aparecieron fragmentos de 21 a 23 nts, independientemente de la presencia de ARNm, indicando que los pequeños ARNs proceden del dsRNA y no del ARNm. Este experimento mostraba además que ambas hebras del dsRNA (la sense y la antisense) se cortan en pequeños fragmentos, porque los fragmentos aparecen tanto cuando los dsRNAs han sido marcados solo en la hebra sense, como cuando has sido marcados sólo en la antisense. Este experimento muestra que los dsRNAs incubados en el extracto son procesados en pequeños fragmentos de ~21-22 nts. Este resultado es similar al resultado en plantas mencionado anteriormente.


title: SiRNA

text: Por tanto, la conclusión de los estudios precedentes es que fragmentos de dsRNA (introducidos en las plantas o añadidos a los extractos) son degradados en fragmentos de ~21-25 nts, que son capaces de reconocer el ARNm diana presente en la planta o en el extracto, induciendo a su vez la degradación de éste.


title: SiRNA

text: Estudios posteriores permitieron elucidar con más detalle el mecanismo de RNAi. Cuando se introducen en un organismo (por ejemplo, en plantas tras la infección con un virus de ARN, o simplemente inyectando dsRNA en plantas o nemátodos), el ARN exógeno es reconocido por la célula y unido a una enzima llamada Dicer, que contiene diferentes dominios. Dicer corta el dsRNA en fragmentos de alrededor de 22 nts. Estos pequeños dsRNAs (siRNAs) se incorporan en un complejo con múltiples componentes, denominado RISC ("RNA-induced silencing complex"). El complejo RISC tiene que ser activado (RISC*) a partir de una forma latente, mediante el desapareamiento de las dos hebras de los siRNAs. RISC* utiliza la hebra antisentido del siRNA como guía para seleccionar su substrato: el ARNm complementario de la hebra de siRNA presente en el complejo. A continuación, RISC* promueve el corte y posterior destrucción del ARNm diana, provocando la supresión de la expresión del gen (en la imagen de la derecha, el mecanismo que utilizan los siRNAs corresponde a la parte central e izquierda).


title: SiRNA

text: La siguiente cuestión que necesitaba resolverse era identificar la enzima ribonucleasa (ARNasa) involucrada en la fragmentación de los dsRNAs. Puesto que se habían purificado previamente los fragmentos de la degradación (los siRNAs), se sabía que la enzima tenía que ser capaz de producir fragmentos con grupos 5' fosfato y 3' hidroxilo, lo cual reducía el número de candidatos: en concreto, las ARNasas de la familia de la ARNasa III fragmentan dsRNAs de esta forma. Se conocían tres tipos de ARNasa III: Para probar cuál de estas ARNasas podía degradar dsRNA en fragmentos de ~22 nt, en 2001 Bernstein y colaboradores expresaron en células S2 de Drosophila todas las proteínas candidatas como proteínas marcadas con una etiqueta (como GST, "glutathione S-transferase"). Las proteínas fueron purificadas con un anticuerpo dirigido contra la etiqueta e incubadas con un dsRNA dirigido contra ciclina E. El resultado de este experimento mostró que solo Dicer es capaz de cortar el dsRNA largo en fragmentos pequeños. Las otras ARNasas no fragmentaron el dsRNA. Como control negativo se utilizó la proteína "homeless", para probar si el dominio helicasa de Dicer podría estar implicado en la reacción. Además el experimento probó que la reacción precisa ATP.


title: SiRNA

text: Para poder unirse a las moléculas de dsRNA, Dicer necesita formar un complejo con otras proteínas que la asisten en sus funciones, como la proteína R2D2 en "Drosophila" o RDE-4 y RDE-1 en "C.elegans".


title: SiRNA

text: Los siRNAs generados por Dicer se ensamblan en el complejo RISC (siglas en inglés de "RNA-induced silencing complex") que contiene diferentes factores celulares.


title: SiRNA

text: El componente activo del complejo RISC es una proteína de la familia de las endonucleasas denominadas Argonautas, que cortan la hebra de ARNm diana complementaria al siRNA que está asociado a RISC. Como los fragmentos producidos por Dicer son de doble hebra, en teoría ambas hebras podrían producir un siRNA funcional. Sin embargo, solo una de las dos hebras (la antisense), denominada la "hebra guía", se une a la proteína Argonauta y dirige el proceso de degradación del ARNm complementario. La otra hebra (la sense), denominada "hebra pasajera", es degradada durante el proceso de activación de RISC. Aunque en principio se supuso que una helicasa dependiente de ATP separaba ambas hebras, en realidad el proceso es independiente de ATP y realizado directamente por proteínas que componen el complejo RISC. La hebra seleccionada como guía tiende a ser aquella cuyo extremo 5' se aparea menos con su complementaria, aunque la selección de la hebra guía no resulta afectada por la dirección en la que Dicer corta el dsRNA antes de su incorporación al complejo RISC. Sin embargo, la proteína R2D2 podría servir como el factor identificador, al unirse al extremo 5' más estable de la hebra pasajera.


title: SiRNA

text: Aunque existen diferentes proteínas de la familia Argonauta (Ago1, Ago2, Ago3 en mamíferos), sólo Ago2 puede formar complejos RISC capaces de fragmentar el ARNm diana. En el mismo estudio, se demostró asimismo que Ago2 es capaz de cortar el ARNm diana "in vitro" en presencia de un siRNA de hebra simple, pero no de un dsRNA, y que la reacción es independiente de ATP. Asimismo, se identificaron dos residuos de Ago2 necesarios para la actividad enzimática: D597 y D669.


title: SiRNA

text: La base estructural para la unión del ARN a la proteína Ago2 ha sido examinada mediante cristalografía de rayos X de la unión del dominio estructural de una proteína Argonauta unida a ARN. En este estudio, el extremo 5' fosforilado de la hebra de ARN se introduce en una hendidura de superficie básica conservada (presente en proteínas homólogas de diferentes especies) y hace contacto a través de un catión divalente (un átomo con dos cargas positivas) como el magnesio, y por apilamiento aromático (un proceso que permite a más de un átomo compartir un electrón, pasándolo adelante y atrás) entre el nucleótido 5' en el siRNA y un residuo conservado de tirosina. Se piensa que este sitio forma un sitio de nucleación para la unión del siRNA a su ARNm complementario.


title: SiRNA

text: Todavía no está claro cómo el complejo RISC activado localiza los ARNm complementarios en el interior celular. Aunque se ha propuesto que el proceso de fragmentación podría estar ligado a la traducción, la traducción del ARNm diana no es esencial para la degradación mediada por RNAi. De hecho, el proceso de RNAi puede ser más efectivo contra ARNm dianas que no son traducidos. Las proteínas Argonauta, los componentes catalíticos de RISC, están localizadas en regiones específicas del citoplasma denominadas "P-bodies" (cuerpos-P, también cuerpos citoplásmicos o cuerpos GW, porque contienen la proteína GW182), los cuales son regiones con altas tasas de degradación de ARNm; también se ha detectado actividad miRNA en los "P-bodies". Alteración de los "P-bodies" disminuye la eficiencia del proceso de RNAi, lo que sugería que los "P-bodies" podrían ser un lugar crítico para el proceso de RNAi. Sin embargo, estudios posteriores han demostrado que los "P-bodies" no son imprescindibles para el proceso de RNAi, puesto que células sin "P-bodies" pueden producir silenciamiento tanto con siRNAs como con miRNAs.


title: SiRNA

text: El mecanismo de RNAi se inicia cuando una célula recibe un ARN de doble hebra largo (dsRNA), que puede generarse a partir de un transgén exógeno, un intruso viral o un elemento genético propio. Este dsRNA largo se fragmenta en siRNAs por una enzima denominada Dicer. Un complejo de silenciamiento inducido por ARN (el complejo RISC) selecciona entre ambas hebras del siRNA: la hebra sense (pasajera) se degrada, mientras que la antisense (guía) se utiliza para localizar el ARNm complementario, y puede tener distintos destinos según el organismo.


title: SiRNA

text: En "Drosophila" y en mamíferos, la hebra antisense se incorpora directamente en el complejo RISC para identificar el mRNA complementario, que será destruido. En ausencia de siRNAs, el complejo RISC carece de especificidad para unirse a ninguna molécula de ARNm. Pero cuando se une a la hebra guía del siRNA, el complejo RISC (ahora activado) puede participar en repetidos ciclos de degradación específica del ARNm diana, produciendo el silenciamiento de la expresión del gen correspondiente. En la mayor parte de los casos, la supresión no es completa, por lo que produce una reducción de la expresión, denominada "knock-down".


title: SiRNA

text: En plantas y en gusanos, después de que Dicer haya procesado el dsRNA originario, la hebra antisense de los siRNAs (primarios) se utiliza en un proceso de amplificación. La hebra antisense, unida a una ARN polimerasa-dependiente de ARN (RdRP, del inglés "RNA-dependent RNA polymerase"), puede aparearse con un ARNm complementario, y actuar como punto de inicio para la síntesis de una nueva molécula larga de dsRNA. Dicer actúa entonces sobre este dsRNA, fragmentándolo para generar nuevas moléculas de siRNA (secundarias), que son específicas para diferentes secuencias del mismo ARNm, generando un efecto de amplificación. También en este caso, el ARNm unido a siRNAs es destruido, produciendo el silenciamiento ("knock-down") del gen correspondiente.


title: SiRNA

text: Esta amplificación en plantas y gusanos permite que el efecto de silenciamiento producido por RNAi se extienda a través de los tejidos somáticos, no reproductivos, por transferencia de dsRNAs directa de célula a célula, generando una amplia resistencia a las infecciones virales.


title: SiRNA

text: Otro descubrimiento sorprendente fue el realizado por Hannon en 2002. Cuando se introducía en "C. elegans" un transgén que contenía una molécula GFP fusionada al gen UNC-22 (un gen responsable de la coordinación motora), seguido de una inyección de dsRNA contra GFP, el resultado era diferente según la posición de la molécula GFP con respecto a UNC-22 en el transgén:La explicación a este fenómeno se debe a la presencia en gusanos de la enzima ARN polimerasa-dependiente de ARN (RdRP), que usa como cebador la hebra antisense de los siRNAs generados a partir del dsRNA contra GFP inyectado (primarios), para la producción de un ARN-antisense largo. Como la enzima RdRP sólo sintetiza ARN en dirección 3'-5', cuando el transgén es UNC-22--GFP, los siRNAs se unen a la molécula de GFP, y amplifican un ARN que contiene ambos genes, UNC-22 y GFP. Este ARN puede aparear con el ARNm del transgén UNC-22--GFP o con el ARNm UNC-22 endógeno del gusano, de forma que al ser fragmentado por Dicer, se generan siRNAs secundarios tanto contra GFP como contra UNC-22, lo que produce el silenciamiento de ambos genes: los gusanos de la progenie son, por tanto blancos (por silenciamiento de GFP) y con descoordinación motora (fenotipo mutante unc-22).


title: SiRNA

text: Sin embargo, cuando el transgén presente es GFP--UNC-22, los siRNAs primarios se unen a GFP y el ARN-antisense largo que se genera sólo incluye la molécula de GFP. Esta molécula sólo se puede aparear con el transgén GFP--UNC-22, pero no con el ARNm UNC-22 endógeno. Por ello, tras la acción de Dicer sólo se generan siRNAs secundarios contra GFP, de manera que los gusanos de la progenie son blancos (por silenciamiento de GFP), pero normales, porque UNC-22 se expresa a partir del gen endógeno.


title: SiRNA

text: La relación entre la dosis de ARN y el fenotipo se analizó mediante la inyección de una serie de diferentes concentraciones de ARN de hebra simple o doble en "C. elegans". Utilizando la concentración más elevada de los ARN sense y antisense individuales contra el gen UNC-22 (3,6 millones de moléculas por gónada) se observó fenotipo mutante en, respectivamente, el 1% y el 11% de los descendientes. La inyección de dosis comparables de ARN de doble hebra produjo, sin embargo, fenotipo mutante en el 100% de los descendientes. Por tanto, la inyección de ARN de doble hebra es al menos 100 veces más eficaz produciendo RNAi que la inyección de ARN de hebra simple.


title: SiRNA

text: En otro experimento, se observó que la inyección de 60.000 (sesenta mil) moléculas de cada hebra de ARN por gusano adulto provocaba el fenotipo mutante en alrededor de 100 descendientes. La expresión de UNC-22 comienza en el embrión cuando este consta de unas 500 células. En este momento, el material inyectado se diluye hasta solamente algunas moléculas de ARN doble hebra por célula. Este resultado sugirió que el ARN doble hebra funciona de una manera catalítica y no estequiométrica, puesto que unas pocas moléculas de ARN doble hebra pueden inducir RNAi. También indicaba que existen etapas de amplificación en el mecanismo de RNAi.


title: SiRNA

text: En las células, un dsRNA largo (inyectado, procedente de un virus...) es fragmentado por Dicer, que genera fragmentos cortos de dsRNA (los siRNAs). La hebra antisense se incorpora al complejo RISC, activándolo. Este complejo identifica el ARNm homólogo del siRNA, cortándolo en dos mitades que son después degradadas por la maquinaria celular.


title: SiRNA

text: Por tanto, el mecanismo de RNAi mediado por siRNAs suprime la expresión génica a nivel post-trancripcional (puesto que la molécula diana es el ARNm), de manera específica a la secuencia. Los resultados de este tipo de supresión son similares (a veces idénticos) a los fenotipos de los mutantes nulos: la supresión puede producir una reducción significativa ("knock-down") o completa ("knock-out") de los niveles de la proteína diana.


title: SiRNA

text: La supresión génica (también llamada silenciamiento) realizada por los siRNAs es extremadamente específica, y solo afecta al ARNm homólogo (aunque con siRNAs sintéticos pueden producirse efectos inespecíficos, denominados efectos "off-target"; ver más adelante).


title: SiRNA

text: En plantas, el RNAi se denomina "silenciamiento génico post-transcripcional" (PTGS, del inglés "post-transcriptional gene silencing"), mientras que en "Neurospora" (un hongo también utilizado como organismo modelo) se denomina "quelling". Estos mecanismos permiten la defensa contra la invasión viríca o de elementos transponibles.


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text: Los efectos sistémicos probablemente se explican por el pequeño tamaño de los siRNAs, que pueden pasar de una célula a otra.


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text: La amplificación de la señal que se observa en ciertos organismos (plantas, "C. elegans") resulta de un mecanismo por el cual los siRNAs antisense se aparean al ARNm homólogo y funcionan como cebador para la transcripción de un ARN antisense por una ARN-polimerasa dependiente de ARN (RdRP), que se aparea con el ARNm homólogo y da lugar, tras la acción de Dicer, a la aparición de siRNAs secundarios.


title: SiRNA

text: "Schizosaccharomyces pombe" (la levadura de fisión) es una levadura ampliamente utilizada en estudios genéticos como organismo modelo (por ejemplo, es el organismo en el que Paul Nurse realizó los estudios sobre el ciclo celular que le permitieron obtener el Premio Nobel de Fisiología o Medicina en 2001). A diferencia de "Saccharomyces cerevisiae" (la levadura del pan, también muy utilizada en estudios genéticos), que tiene pequeños centrómeros puntuales de unos 100bp, "S. pombe" tiene centrómeros más largos (40-100kb), con secuencias repetitivas, similares a los centrómeros de mamíferos.


title: SiRNA

text: Los elementos repetitivos que rodean al centrómero (cen) son transcritos en "S. pombe" para producir cenRNAs no-codificantes. Estas secuencias repetitivas y los cenRNAs atraen enzimas Histona Metil-Transferasa (HTMasas, de las siglas en inglés) tipo H3K9 (metilan la lisina9 de la histona H3), proteínas HP1 y otros complejos que median la formación de heterocromatina. La proteína HP1 recluta cohesinas para promover la cohesión de las cromátidas hermanas en los centrómeros. Los nucleosomas asociados con regiones de heterocromatina presentan metilación H3K9 y están hipoacetilados (es decir, presentan pocos grupos acetilo -CO-CH3 asociados), mientras que los nucleosomas de las regiones de eucromatina portan metilación en H3K4 (en lisina4 de la histona H3) y están hiperacetilados. Las regiones heterocromáticas de los telómeros y otras regiones cromosómicas comparten muchas propiedades con la heterocromatina centromérica.


title: SiRNA

text: En "S. pombe", se han identificado algunos componentes de la maquinaria de RNAi asociados a la generación de heterocromatina centromérica:


title: SiRNA

text: El modelo de "tránscrito naciente" propone que el complejo RITS interviene en la formación de heterocromatina, asociándose con los tránscritos nacientes a través del apareamiento de bases con los siRNAs de hebra simple presentes en el complejo, además de asociarse con los grupos metilo H3K9 de los nucleosomas a través del dominio cromo de su subunidad Chp1. La síntesis de dsRNA y generación de siRNAs ocurre en asociación con regiones cromosómicas específicas y esto puede ser la causa de la restricción en "cis" (es decir, en la misma molécula de ADN donde se genera) del silenciamiento mediado por siRNAs. El circuito de síntesis de siRNA asociado a los cromosomas es esencial para la difusión de la metilación en H3K9 y el silenciamiento en los centrómeros. El acoplamienteo del circuito de síntesis de siRNAs con la metilación en H3K9 forma un circuito de retroalimentación ("feedback loop") que mantiene la heterocromatina de manera epigenética.


title: SiRNA

text: Por el momento (2008), el papel de los cenRNAs no codificantes en el ensamblaje de la heterocromatina centromérica sólo se ha demostrado en "S. pombe", aunque algunos componentes del mecanismo de RNAi contribuyen al silenciamiento de genes en las zonas pericentroméricas en "Drosophila melanogaster".


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text: Los tipos de herramientas que se utilizan para obtener RNAi en el laboratorio son diferentes según los organismos:


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text: Aunque las moléculas de dsRNA pueden inducir RNAi específico en embriones tempranos de ratón y en ovocitos de ratón, en células somáticas de mamíferos los dsRNAs también activan muchas rutas celulares, algunas de las cuales pueden producir apoptosis.


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text: La proteína kinasa dependiente de dsRNA (PKR) es un importante "detector" antiviral, que se activa al unirse a dsRNAs largos, como los producidos por los virus. Una vez que se activa PKR, ésta inhibe la traducción de proteínas a través de la fosforilación de una de las subunidades del factor de iniciación de la traducción (EIF2). La fosforilación de EIF2 produce una supresión general de la síntesis proteica que dirige a la célula hacia la apoptosis. PKR también activa las enzimas 2',5'-OligoA sintetasa y ARNasa L, que son componentes centrales de una importante vía antiviral. Cuando se unen a los dsRNAs, la 2',5'-OligoA sintetasa se activa, generando oligo-adenilatos que activan la ARNasa L, que a su vez degrada el ARN. Los dsRNAs también pueden inducir la expresión de interferón que, conjuntamente con otras señales, pueden estimular la apoptosis.


title: SiRNA

text: Sin embargo, en 2001, Thomas Tuschl y sus colegas demostraron que siRNAs sintéticos de tamaño inferior a 30pb son capaces de inducir RNAi en células de mamífero sin activar las vías de PKR e interferón, un trabajo que fue publicado en Nature. Este descubrimiento suscitó un gran interés en la utilización de la técnica de RNAi para investigación biomédica y desarrollo de nuevos fármacos.


title: SiRNA

text: Como se indica en el punto "Herramientas para el silenciamiento de genes", en el caso de células somáticas de mamíferos se pueden introducir bien directamente siRNAs sintéticos o bien un plásmido (o un vector viral) que contenga una horquilla que exprese el siRNA. En este segundo caso se habla de expresión de "shRNAs" (siglas en inglés de "short hairpin RNA"), que son procesados por la enzima Dicer para generar siRNAs funcionales (ver miRNAs).


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text: Los siRNAs son moléculas de dsRNA de alrededor de 22 nts, con un grupo fosfato en el extremo 5' y un grupo hidroxilo en el extremo 3'. El corte del ARNm diana se produce a nivel de la posición 10 a 11 a partir del extremo 5' de los nucleótidos apareados (no se produce ningún otro corte fuera de esta zona), y el corte del ARNm es más eficiente si en sus extremos 3' los siRNAs presentan de 2 a 3 nucleótidos libres. Asimismo, la eficacia del siRNA depende de la accesibilidad de la zona de apareamiento en el ARNm diana: la presencia de estructuras secundarias en dicha zona del ARNm o la unión de proteínas en esa zona puede impedir la unión del siRNA, disminuyendo su eficacia.


title: SiRNA

text: En la actualidad, existen muchos algoritmos disponibles para el diseño de siRNAs, tanto comerciales en empresas especializadas (Dharmacon , Ambion , Qiagen , Invitrogen , Sigma , etc.) como en entornos académicos (ver también la página web de Nature sobre RNAi ).


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text: Los siRNAs sintéticos pueden obtenerse de diversas formas:


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text: Las moléculas de siRNA o shRNA se introducen en las células mediante técnicas de transfección. Es interesante destacar que la ruta del RNAi se puede modular extracelularmente utilizando moléculas químicas pequeñas. En un estudio publicado en agosto de 2008, se desarrolló un ensayo basado en células para monitorizar la actividad de la ruta del RNAi, y los autores detectaron que la molécula "enoxacin (Penetrex)" mejora la degradación del ARNm mediada por siRNA, y promueve la biogénesis de los miRNAs endógenos. Este artículo prueba que pequeñas moléculas químicas pueden mejorar la eficacia de la ruta del RNAi, lo que podría ser útil en el desarrollo de herramientas para la investigación y terapéuticas.


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text: Los siRNAs (y los shRNAs) pueden producir una reducción no intencionada de la expresión de ciertos genes cuya secuencia es próxima a la del siRNA, por corte del ARNm correspondiente o por la inhibición de su traducción. Los efectos "off-target" pueden aparecer si los siRNAs imitan el reconocimiento del ARNm diana por los microRNA.


title: SiRNA

text: Estos efectos inespecíficos pueden reducirse mediante la modificación química del segundo residuo de la hebra activa del siRNA (que es muy importante para la actividad del microRNA) sin afectar al silenciamiento del ARNm diana específico.


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text: La predicción de los efectos "off-target" no es muy útil por el momento, pero durante el proceso de diseño es necesario eliminar todos los siRNAs que presenten una similitud significativa a moléculas de ARNm no deseadas, mediante la utilización de BLAST . Asimismo es aconsejable utilizar una concentración de siRNAs en el medio de transfección inferior a 100 micromolar, puesto que por encima de dicho valor, aumenta la probabilidad de obtener efectos inespecíficos. Por esta razón, es más sencillo controlar la aparición de efectos "off-target" con siRNAs sintéticos (puesto que se puede controlar su concentración en el medio de cultivo) que con shRNAs, puesto que en este caso el nivel de expresión (que depende del tipo de promotor utilizado) puede variar mucho de célula a célula.


title: SiRNA

text: La especificidad y la robustez del efecto de RNAi sobre la expresión génica hace de este mecanismo una valiosa herramienta en investigación, tanto en cultivos celulares como en organismos vivos, puesto que dsRNAs o siRNAs sintéticos o transgénicos pueden introducirse en las células para inducir el silenciamiento selectivo de genes específicos de interés. Esto ha permitido un avance espectacular en el desarrollo de la biología celular, puesto que el RNAi es una herramienta simple y rápida para la comprensión de la función de los genes (a pesar de que en último término es conveniente desarrollar el organismo "knockout" para asegurar la consistencia de los resultados).


title: SiRNA

text: La técnica de RNAi en el laboratorio también puede utilizarse para silenciar sistemáticamente cada uno de los genes de la célula (análisis genómico), lo que puede ayudar a identificar los componentes necesarios para un proceso celular en particular, como la división celular o las vías de señalización, por ejemplo. De hecho, en la actualidad existen colecciones a gran escala de RNAi de mamíferos disponibles públicamente, tanto en empresas comerciales (Dharmacon, Ambion, Qiagen o Sigma, ver links en el apartado "siRNAs y shRNAs") como en instituciones académicas (de ratón o de humano: , , ).


title: SiRNA

text: Por otro lado, la explotación de la vía de RNAi es también una herramienta prometedora en biotecnología y medicina. Como comparación en la generación de modelos animales para el estudio de enfermedades:


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text: La ruta del RNAi se utiliza a menudo en biología molecular y celular para estudiar la función de los genes en cultivos celulares e "in vivo" en organismos modelo. Para ello, se sintetiza dsRNA (o siRNAs/shRNAs en mamíferos) con una secuencia complementaria a la del gen de interés y se introduce en una célula u organismo, donde se reconoce como material genético extraño, lo que activa la ruta del RNAi. Utilizando este mecanismo, los investigadores pueden producir una reducción drástica en la expresión del gen diana. Estudiando los efectos de esta disminución se pueden dilucidar las funciones fisiológicas del producto de ese gen (la proteína correspondiente). Puesto que el RNAi puede no bloquear completamente la expresión del gen de interés, normalmente suele referirse a esta técnica como "knockdown", para distinguirla de los procedimientos de "knockout" en la que la expresión del gen es completamente suprimida.


title: SiRNA

text: La mayoría de las aplicaciones de RNAi en genómica funcional en animales han utilizado "C. elegans" y "Drosophila", puesto que estos son los organismos modelo en los que el mecanismo de RNAi es más efectivo. "C. elegans" es particularmente útil para la investigación con RNAi por dos razones: primero, los efectos de silenciamiento de genes son normalmente heredables, y segundo, porque la administración de dsRNA es extremadamente simple (ver Herramientas para el silenciamiento de genes). Aunque la administración es más difícil en otros organismos, también se están haciendo esfuerzos para realizar estudios genómicos a gran escala en células de mamíferos.


title: SiRNA

text: Las aproximaciones para el diseño de librerías genómicas de RNAi pueden requerir mucha más sofisticación que el diseño de un solo siRNA para un conjunto definido de condiciones experimentales. Frecuentemente se utilizan redes neuronales artificiales para diseñar librerías de siRNA y para predecir la probabilidad de su eficiencia en el silenciamiento de genes. El screening genómico masivo se ve generalmente como un método prometedor para avanzar en la anotación del genoma y ha desencadenado el desarrollo de métodos de "screening" a gran escala ("high-throughput") basados en microarrays. Sin embargo, la utilidad de esos "screens" y la posibilidad de aplicar las técnicas desarrolladas en organismos modelo incluso a especies relacionadas es cuestionable, por ejemplo desde "C. elegans" a nemátodos parasíticos relacionados.


title: SiRNA

text: La genómica funcional utilizando RNAi es una técnica particularmente atractiva para el mapeo y anotación genómicos en plantas, porque muchas plantas son poliploides, lo que representa un reto significativo para métodos genéticos más tradicionales. Por ejemplo, el RNAi ha sido utilizado con éxito para estudios genómicos funcionales en el trigo del pan (que es hexaploide), así como en los sistemas modelos de plantas más comunes, como "Arabidopsis" y el maíz.


title: SiRNA

text: Una posibilidad muy interesante es la utilización del mecanismo de RNAi en terapia. Aunque es difícil introducir dsRNAs largos en células de mamíferos debido a que estos desencadenan la respuesta de interferón, el uso de siRNAs (sintéticos o shRNAs) ha tenido más éxito. Entre las primeras aplicaciones en llegar a la fase de ensayos clínicos, se encuentra el tratamiento de la degeneración macular y el virus respiratorio sincitial. El RNAi también se ha mostrado efectivo en la reversión de fallo hepático inducido en modelos de ratón.


title: SiRNA

text: Otros usos clínicos propuestos se centran en terapias antivirales, incluyendo la inhibición de la expresión génica viral en células cancerosas, silenciamiento de los receptores y correceptores del HIV en el huésped, el silenciamiento del virus de la hepatitis A y de la hepatitis B, el silenciamiento de la expresión del virus de la gripe y la inhibición de la replicación del virus del sarampión.


title: SiRNA

text: También se han propuesto tratamientos potenciales para enfermedades neurodegenerativas, prestando atención particular a las enfermedades de poliglutaminas tales como la enfermedad de Huntington. La interferencia de ARN también se considera una alternativa prometedora para tratar el cáncer, mediante el silenciamiento diferencial de genes sobreexpresados en células tumorales o genes involucrados en la división cellular (mitosis).


title: SiRNA

text: En la revista "Molecular Therapy" (del grupo "Nature"), puede encontrarse una serie de artículos de acceso libre que tratan sobre la técnica de RNAi como estrategia terapéutica, que resume diferentes áreas de investigación publicadas en diferentes revistas.


title: SiRNA

text: Un área clave de investigación en el uso de RNAi en aplicaciones clínicas es el desarrollo de un método de administración seguro, que hasta el momento implica sobre todo el uso de sistemas de vectores virales similares a los que se utilizan en terapia génica, aunque también se utilizan otros mecanismos como aerosoles, siRNAs encapsulados en liposomas, conjugados con colesterol o asociados a complejos anticuerpo-protamina.


title: SiRNA

text: A pesar de la proliferación de estudios en cultivos celulares para drogas basadas en RNAi, existen algunas preocupaciones en relación a la seguridad del RNAi, especialmente debido a los posibles efectos "off-target" (ver Efectos inespecíficos (off-target)), en los que un gen con una secuencia similar al gen diana es también silenciado. Un estudio de genómica computacional ha estimado que la tasa de error debido a efectos "off-target" es aproximadamente del 10%. Un importante estudio de enfermedad hepática en ratón produjo una alta tasa de mortalidad en los ratones experimentales, debido según los investigadores a la sobresaturación de la vía del RNAi, a causa de la utilización de shRNAs que deben procesarse en el núcleo y exportarse al citoplasma por un mecanismo activo. Todas estas son consideraciones que están bajo intenso estudio en la actualidad, para reducir su impacto en la utilización terapéutica del RNAi.


title: SiRNA

text: La interferencia de ARN se ha utilizado en aplicaciones de biotecnología, particularmente en el diseño de plantas alimenticias que producen niveles bajos de toxinas naturales de plantas. Esta técnica aprovecha el fenotipo estable y heredable del RNAi en plantas. Por ejemplo, las semillas de algodón son ricas en proteínas nutritivas, pero contienen de forma natural el producto terpenoide tóxico "gossypol", haciéndolo no apto para el consumo humano. Se ha utilizado RNAi para producir cepas de algodón cuyas semillas contienen niveles reducidos de delta-cadineno sintetasa, una enzima clave en la producción de gossypol, sin afectar la producción de gossypol en otras partes de la planta, donde el gossypol es importante en la prevención del daño producido por los agentes infecciosos de la planta. Esfuerzos similares se han dirigido hacia la reducción del producto natural cianogénico "linamarino" en plantas de yuca.


title: SiRNA

text: Aunque ningún producto vegetal que utilice ingeniería genética basada en RNAi ha pasado todavía la fase experimental, los esfuerzos en el desarrollo de estos productos han reducido con éxito los niveles de alérgenos en plantas de tomate y han disminuido los precursores de carcinógenos probables en plantas de tabaco. Otras características vegetales que han sido modificadas en el laboratorio incluyen la producción de productos naturales no-narcóticos en "opium poppy", resistencia a virus de plantas comunes y refuerzo de plantas como los tomates con antioxidantes dietéticos. Productos comerciales previos, como el tomate "Flavr Savr" y dos cultivares de papaya resistentes al "virus anillado de la papaya", fueron originalmente desarrollados utilizando tecnología antisense, pero probablemente explotaban la ruta del RNAi.


title: Boromir

text: Boromir es un personaje ficticio que pertenece al legendarium creado por el escritor J. R. R. Tolkien y que aparece en su novela "El Señor de los Anillos". Es un dúnadan, hijo mayor del senescal de Gondor Denethor II, hermano mayor de Faramir y predilecto del vigésimo cuarto y último senescal regente del reino de Gondor. Como primogénito de este, Boromir era capitán de la Torre Blanca y portaba el Gran Cuerno de Vorondil, principal heredad de la Casa de los Senescales.


title: Boromir

text: Tras tener un sueño profético sobre el Anillo Único, Boromir partió hacia Rivendel, la tierra del medio elfo Elrond, con la esperanza de encontrar allí respuestas. Acabó así formando parte de la Compañía del Anillo, cuyo objetivo era llevar el preciado objeto hasta Mordor y destruirlo en los fuegos del Monte del Destino, lugar donde fue forjado, para que el señor oscuro Sauron, quien puso parte de su poder en él, pudiera ser derrotado. Durante el viaje Boromir se pervirtió por la influencia maligna del Anillo, e intentó arrebatárselo por la fuerza a su portador, el hobbit Frodo Bolsón. Purgó esa falta defendiendo a sus compañeros Peregrin Tuk y Meriadoc Brandigamo del ataque de una horda de uruk-hai, acto en el que murió.


title: Boromir

text: Boromir ha aparecido en las distintas adaptaciones que se han hecho de "El Señor de los Anillos", incluyendo la trilogía cinematográfica del director neozelandés Peter Jackson, donde es interpretado por el actor Sean Bean.


title: Boromir

text: Boromir fue descrito por Tolkien como un nombre «mixto»; posiblemente combine elementos en quenya y en sindarin: "bor(on)-" («inquebrantable» en sindarin) + "mîr" («joya» en sindarin) o + "míre" (también «joya», pero en quenya); para dar un significado de «Joya inquebrantable». Sin embargo, los Senescales de Gondor solían elegir nombres «mentados en antiguas canciones e historias de la Primera Edad», sin atender a su significado, por lo que el nombre «Boromir» pudo haber sido adoptado simplemente por copia del de Boromir, un Edain de la Casa de Bëor en la Primera Edad, mencionado en "El Silmarillion".


title: Boromir

text: Boromir nació en 2978 T. E. Era hijo de Denethor y de Finduilas, hija del príncipe Adrahil de Dol Amroth. Desde muy joven se destacó en el uso de las armas y en la destreza guerrera, lo que llevó a colocarlo en las preferencias de su padre, como hijo predilecto. De carácter fuerte y orgulloso, siempre tuvo el deseo de devolver a Gondor el antiguo esplendor. Además no podía entender cómo su familia no había podido superar la tradición, convirtiéndose los Senescales Regentes en Reyes, puesto que para él era improbable que existiera el verdadero heredero de Isildur, y le dolía profundamente que, a pesar de tantos años de Senescales al frente de Gondor, estos no podían conducirlo como reyes. Este pensamiento acentuó aún más su orgullo y fue una guía para toda su vida.


title: Boromir

text: En el año 3018 de la Tercera Edad del Sol dirige la defensa de la costa occidental del Anduin del ataque de los ejércitos de Mordor, dirigidos por el Rey Brujo de Angmar. Junto a su hermano Faramir contraataca a las fuerzas orcas que acababan de conquistar Osgiliath. En la batalla logra hacer que los orcos se retiren a la rivera oriental del Anduin y destruye el puente de Osgiliath, impidiendo el ataque a Minas Tirith, y avanza hasta Ithilien, devolviendo a los ejércitos orcos hasta Minas Morgul.


title: Boromir

text: Estando en plena campaña contra los orcos de Mordor, y junto a su hermano menor Faramir, tiene un extraño y profético sueño (que Faramir ya había tenido varias veces) en el que una voz le decía: "(...)"Busca la espada quebrada, que está en Imladris; habrá concilios más fuertes que los hechizos de Morgul. Mostrarán una señal de que el Destino está cerca: el Daño de Isildur despertará, y se presentará el Mediano"..." Tras contárselo a su padre, este lo único que consintió (no es "consintió", pues era lo único que pudo saber; más cercano a la verdad sería decir "acertó a decirles" en decirle, fue que Imladris era desde tiempos remotos el nombre que daban los elfos a un lejano valle del norte, donde vivía Elrond el Medio Elfo, el más grande de los maestros del saber. Por el deseo de acabar con Sauron, marchó a Rivendel a pesar de una discusión con su hermano Faramir y por tratarse del primogénito. Boromir partió en su lugar buscando una respuesta. "(...)"Yo (Faramir) había sido elegido por mi padre y los ancianos, pero él se adelantó, por ser el mayor y el más osado, y no escuchó razones". Y tras 110 días de viaje, en el que sufrió muchas peripecias, hasta incluso llegar a perder su caballo en Tharbad, llegó para participar del Concilio de Elrond y buscar respuestas al enigma.


title: Boromir

text: El interés de Boromir por tener al Anillo Único no respondía, como en el caso de Isildur, a una ambición desmedida por poder, sino más bien a la necesidad de usarlo contra el propio mal para salvar a su pueblo, como quedó claro cuando en el Concilio de Elrond propuso llevar el anillo a Minas Tirith para ayudar en la lucha contra Mordor, y a pesar de las advertencias de Gandalf y del Medio-Elfo no quedó convencido. Algo de su personalidad se trasluce en su posición al respecto y el que mejor lo explica es su hermano Faramir, cuando sostiene que desde joven lo enojaba la idea de que su padre no fuera Rey. Además Faramir, al enterarse por boca de Frodo del intento de quitárselo, decía que si el Anillo "(...)"fuese un talismán que procurara ventajas en la guerra, puedo creer por cierto que Boromir, el orgulloso y el intrépido, el a menudo temerario Boromir, siempre soñando con la victoria de Minas Tirith (y con su propia gloria) haya deseado poseerlo y se sintiera atraído por él"..."


title: Boromir

text: Orgullo, fidelidad a su casa y osadía parecieran ser los componentes de la personalidad de Boromir que lo llevaron en búsqueda de respuestas al sueño y luego a desear el Anillo. Al decir de Sam el mismo Boromir llevaba el peligro en sí mismo, puesto que apenas vio el Anillo quiso tenerlo para sí.


title: Boromir

text: Ya en el Concilio de Elrond, Boromir planteó su disconformidad sobre la idea de llevar el Anillo a su destrucción, puesto que creía que era mejor llevarlo a Gondor y aprovechar su poder para derrotar a Sauron. Para él la Espada de Elendil (Narsil), forjada de nuevo, y la posesión del Anillo Único serían unas herramientas poderosas para derrotar definitivamente a Sauron; e incluso pregunto: “(...)"¿Por qué no pensar que el Gran Anillo ha llegado a nuestras manos para servirnos en esta hora de necesidad? Llevando el Anillo, los Señores de los Libres podrían derrotar al enemigo"...”


title: Boromir

text: Como se ve Boromir no alcanzaba a comprender que el poder del Anillo termina destruyendo a quien lo posee, puesto que como dijo Elrond "(...)"La fuerza del Anillo, Boromir, es demasiado grande para que alguien lo maneje a voluntad, salvo aquellos que ya tienen un gran poder propio. Pero para ellos encierra un peligro todavía más mortal. Basta desear el Anillo para que el corazón se corrompa"". Con muchas dudas terminó aceptando la idea de destruirlo en lugar de utilizarlo. Pero las cosas cambiaron cuando Gandalf cayó en Moria. Allí la Compañía comenzó a dudar de cual debía ser el destino del Anillo, puesto que el principal guía (ahora caído) era quien con más fuerza había impuesto la idea de destruirlo. Y Aragorn, al quedar al frente del grupo de valientes, sintió que su sangre númenóreana lo ponía en la disyuntiva de seguir con la compañía hacia Mordor o correr en ayuda de Gondor. Esto probablemente despertó en Boromir la idea de apoderarse del Anillo para usarlo contra Sauron, tanto que Galadriel se dio cuenta, en Lothlórien, de los pensamientos del hombre de Gondor, aunque no lo reveló en su momento.


title: Boromir

text: A medida que la Compañía se iba acercando a su destino, las dudas de Boromir se iban acentuando; pero fue la estadía de la Compañía en el Bosque de Lothlórien lo que marcó para Boromir un punto de inflexión en sus dudas acerca del camino a seguir sobre la cuestión del Anillo y como dijimos más arriba la Dama Élfica del Bosque de Lórien se dio cuenta de ello al leer sus pensamientos, cuando en su saludo lo miró directamente a los ojos y buceó en su interior; y el hombre de Gondor no pudo sostener la mirada y quedó sumamente turbado.


title: Boromir

text: Por lo anterior no era de extrañar que al momento de partir del Bosque Dorado se planteara, claramente la duda por el camino a seguir. Incluso el mismo Boromir planteo que su idea era la de regresar a Minas Tirith al decir que elegiría seguir por la orilla occidental del Anduin cruzando el reino de Rohan, en donde encontrarían aliados. Porque para él sería una locura entrar a Mordor sin una fuerza poderosa y sería también "(...)"una locura sacrificar vidas"...". Para Boromir se trataba de "(...)"elegir entre defender una plaza fortificada y marchar directamente hacia la muerte"..."


title: Boromir

text: El ofrecimiento de Celeborn de embarcaciones élficas y el conocimiento de que por tierra era peligroso el viaje, pospuso la discusión, puesto que hasta no llegar a los saltos del Rauros no tendrían que definir.


title: Boromir

text: Su presencia en la Comunidad del Anillo obedecía al hecho de que representaría a uno de los pueblos libres de la Tierra Media que más había aportado a la lucha para contener al Señor oscuro, y además porque el camino elegido para el Portador del Anillo lo llevaba directamente al sur y parte de las tierras a recorrer se encontraban en Gondor; de ahí que Boromir pensaba que un punto de partida para entrar en Mordor podía ser Minas Tirith. No había abandonado la esperanza de convencer a Frodo y a los demás de la opción de usar el Anillo.


title: Boromir

text: A lo largo de la dura misión, fue un miembro muy valioso para la Comunidad. Ya en el primer tramo del viaje mostró su valentía y decisión.


title: Boromir

text: En el Paso del Cuerno Rojo, y aprovechando su experiencia en sus viajes por las Montañas Blancas, aconsejó llevar atados de leña para evitar la muerte por congelamiento, lo que salvó a la Compañía en la más grande y extraña nevada caída en el sendero. Su arrojo también permitió despejar un poco el camino, cuando con Aragorn se lanzaron hacia delante, abriendo una brecha en la nieve para evitar que los hobbits murieran congelados. Solo la avalancha de piedras provocada por un raro artilugio les impidió continuar por ese camino. Esto le dio la oportunidad para insistir en que el mejor camino era el Paso de Rohan, idea que fue rechazada por Gandalf, por el temor a ser capturados por Saruman en las cercanías de Isengard.


title: Boromir

text: Por ello, y a pesar de su desacuerdo, la Compañía intentó el cruce por Moria. Cuando se dirigían hacia la Puerta Oeste de la mina debieron luchar contra Lobos de Sauron en Acebeda. Boromir demostró no solo su coraje, sino su habilidad para el uso de la espada, ya que dio muerte a muchos de ellos. Acostumbrado a dar órdenes no aceptaba de buena gana las directivas de Gandalf ni menos de Aragorn (mentira, tenía a Aragorn en la más altas de las estimas por la estirpe de la que procedía). Solo su palabra empeñada de acompañar a Frodo y su sentido de lealtad para con los miembros le impedían romper la unidad, pero siempre hacía oír su voz.


title: Boromir

text: En las puertas de Khazad-dûm, y sin darse cuenta, Boromir arrojó una piedra (en la película, no fue Boromir quien arrojó la piedra sino Merry, uno de los hobbits) al lago oscuro que rodeaba la entrada a la mina, lo que despertó al monstruoso Guardián de la Puerta, quien atrapó a Frodo. La rápida acción de Sam y de Boromir evitó que el hobbit fuera tragado por la bestia; afortunadamente las puertas ya estaban abiertas y pudieron huir hacia adentro de la mina; cuando comenzaron a andar el camino, Boromir susurró entre dientes, pero la piedra resonante amplificó el sonido convirtiéndolo en un murmullo ronco que todos pudieron oír: "(...) "-¡En las profundidades del mundo! Y ahí vamos, contra mi voluntad. ¿Quién nos conducirá en esta oscuridad sin remedio?"..."


title: Boromir

text: En Moria luchó bravamente contra los peligros que acechaban en la mina, con los orcos y los trolls en la Cámara de Mazarbul y luego cubriéndoles la espalda al resto que huía hacia el Puente de Khazad-Dûm. Con la aparición del Balrog, Boromir y Aragorn decidieron respaldar al Mago en el desafío; Boromir alzó entonces el cuerno y sopló."(...)"El desafío resonó y rugió como el grito de muchas gargantas bajo la bóveda cavernosa. Los orcos titubearon un momento y la sombra ardiente se detuvo"..." Gandalf les gritó que huyeran con los otros pero Aragorn y Boromir hicieron caso omiso de la orden y afirmando los pies en el suelo se quedaron juntos detrás de Gandalf, en el extremo del puente; y solo cuando el Mago cayó al abismo, ambos corrieron apresuradamente hacia la salida, en el momento mismo que el puente se derrumbaba. Todos corrieron desesperadamente hacia fuera de la mina a una orden de Aragorn; Boromir cerraba la marcha corriendo en la retaguardia.


title: Boromir

text: Ya fuera de peligro por el momento, todos dieron rienda suelta a su tristeza, pero la marcha continuó porque los Orcos podrían seguirlos, hasta que pasado el Lago Espejo Aragorn recordó a los heridos y llamó a Boromir para que lo ayudara; el capitán de Gondor alzó a Frodo entre sus brazos y lo llevó hasta las cercanías de un arroyo que descendía de las Montañas Nubladas y se unía al Cauce de Plata, en donde Aragorn curó y lavó las heridas de Sam y de Frodo.


title: Boromir

text: Como vimos más arriba, la estadía en Lothlórien fue crucial para Boromir y para el destino de la Compañía. Si bien se repusieron de las duras penalidades sufridas, la discusión sobre los caminos a seguir duró bastante tiempo y al fin cuando partieron desde el embarcadero en la confluencia entre el Anduin y el Celebrant, la suerte de todos los miembros y en especial del Capitán de Gondor, estaba echada.


title: Boromir

text: Celeborn dio explicaciones precisas de las rutas posibles a tomar y Galadriel ofreció regalos acordes con las necesidades y con las expectativas de los viajeros; a Boromir le dio un cinturón de oro.


title: Boromir

text: Salir del Bosque Dorado no hizo otra cosa que alimentar un sentimiento de indefensión en todos los miembros de la Comunidad del Anillo, puesto que el momento crucial se acercaba pronto y nadie creía tener la fuerza suficiente para llevar a buen término la Misión, excepto Boromir; "(...)"En cuanto a mí -dijo-, el camino de regreso está adelante y no atrás"..."


title: Boromir

text: Durante el viaje por el Río Grande hacia el sur, la duda y el deseo de poseer el anillo fueron adueñándose de la mente de Boromir y lo mostraba con algunas actitudes que denotaban esa lucha interna; Merry y Pippin, que viajaban con él en la barca lo advirtieron, aunque sin saber la razón; veían que este estaba muy nervioso, murmuraba palabras ininteligibles, siempre trataba de acercar su barca a la de Frodo y en varias ocasiones Pippin observó una rara luz en los ojos del Dúnadan del Sur.


title: Boromir

text: En Sarn Gebir fueron atacados por orcos y cuando Aragorn planteó cruzar los rápidos llevando las barcas por un sendero hasta un muelle río abajo, Boromir expuso abiertamente su disconformidad; dijo que no valía la pena seguir por el río puesto que era más fácil, para llegar a Minas Tirith, emprender el camino por el oeste y el sur hasta el Entaguas desde donde estaban; Aragorn le contestó que eso podía ser factible si iban a la Ciudad, pero que todavía no estaba decidido y "(...)"ese rumbo puede ser más peligroso de lo que parece"...". La discusión se zanjó, momentáneamente, puesto que los otros miembros se pusieron de lado del Dúnadan del Norte. En esas instancias, más aún estando en territorio propio, su humor cambió y se puso irónico y despreciativo.


title: Boromir

text: En los prados de Parth Galen, a los pies del Amon Hen, donde los miembros de la Comunidad tuvieron que decidir si seguían hacia el Sur o cruzaban el río Anduin hacia Mordor, Frodo, el Portador del Anillo, se apartó de los demás para reflexionar sobre el camino a seguir. En realidad ya lo tenía decidido pero temía llevar a la Compañía puesto que lo consideraba un viaje sin retorno y no quería arriesgar la vida de ninguno de sus amigos. Además, no quería exponerlos a las tentaciones del Anillo. Mientras pensaba como decírselos, llegó hasta el prado que se extendía a los pies del Amon Hen y se sentó a meditar.


title: Boromir

text: Boromir le siguió con la intención de hacerle cambiar de opinión sobre la destrucción del Anillo ya que, como sabemos, consideraba una locura dejar que Frodo fuera con el Anillo hasta Mordor. Lo encontró sentado en una piedra y se le acercó por la espalda; Frodo enseguida se percató de que alguien estaba detrás de él y se dio vuelta rápidamente, y vio a un Boromir sonriente y de cara bondadosa; pero no le gustó un extraño resplandor en sus ojos cuando le planteó de nuevo su tesis de que el Único debía estar en Minas Tirith; ante la negativa del Hobbit, Boromir mostró que sus intenciones eran tomarlo por la fuerza, mientras el Portador no lo cediera voluntariamente. Hasta su tono de voz cambió y Frodo se dio cuenta de ello y sintió miedo. El gondoriano siguió insistiendo pero la negativa de Frodo se acentuó, y Boromir comenzó a caminar de un lado a otro, impaciente, nervioso, y hablándole en contra de lo que en el Concilio de Elrond se había dicho. Fuera de sí, saltó sobre Frodo intentando sacarle el Anillo; pero el hobbit lo esquivó y se puso el Anillo desapareciendo de la vista del hijo de Denethor. Esto lo enfureció tanto que, a ciegas, intentaba atrapar a Frodo, gritándole y maldiciéndolo; enseguida comenzó a correr tratando de alcanzar al invisible Hobbit y un poco más adelante tropezó y cayó al piso, golpeándose y quedando tendido de bruces por un largo rato.


title: Boromir

text: La caída y la lejanía del Anillo pareció despejar su mente y hacerlo volver en sí. La maldad del Anillo lo había dominado, como parecía ser el efecto que causaba a todo ser, cuando se acercaban al Único; se levantó llorando: se había dado cuenta de su locura y ahora le pesaba el remordimiento en el alma. Desesperado por lo que había hecho, Boromir regresó al lugar en donde lo esperaba el resto de la Comunidad y al llegar contó parte de los sucedido; todos se desesperaron, pero Sam se enfureció porque entendió que Frodo se había puesto el Anillo, porque quería huir de Boromir; y antes de que pudiera decir nada todos salieron corriendo, desesperados a buscar al Portador.


title: Boromir

text: Aragorn, que no pudo contener la desbandada, le ordenó a Boromir que siguiera a Merry y a Pippin para protegerlos mientras él seguía a Sam. El Hombre de Gondor fue tras ellos y los alcanzó como a una milla en un claro de un pequeño bosque; luchando contra un grupo de uruk-hai que, curiosamente, no trataban de matar a los hobbits sino de atraparlos. La embestida de Boromir' diezmó a los uruk-hai; pero cuando trataban de volver hacia la costa, fueron atacados de nuevo por un grupo más numeroso.


title: Boromir

text: Boromir sopló su gran cuerno hasta que se partió. Luchó bravamente en esta segunda embestida, mató a más de una veintena antes de ser traspasado por numerosas flechas: Se apoyó en un árbol grande y lentamente cayó hasta quedar sentado en el suelo. Así lo encontró Aragorn, quien lo tomó entre sus brazos, y abriendo los ojos le dijo: "(...)Traté de sacarle el Anillo a Frodo -dijo-. Lo siento. He pagado. -Echó una ojeada a los enemigos caídos; veinte por lo menos estaban tendidos allí cerca. Partieron- dijo. -Los Medianos, se los llevaron los orcos. Pienso que no están muertos. Los orcos los maniataron-. -¡Adiós, Aragorn! ¡Ve a Minas Tirith y salva a mi pueblo! Yo he fracasado..." Y no dijo más. Sólo sonrió cuando Aragorn le dijo que había realizado una gran hazaña, luego le tomó la mano y lloró.


title: Boromir

text: Así los encontraron Legolas y Gimli, quienes al ver la escena se sintieron abrumados por el dolor. Luego de su muerte su cuerpo fue puesto en una de las barcas que los elfos les habían facilitado en Lothlórien, ”(...)"plegaron la capucha gris y la capa élfica y se las pusieron bajo la cabeza. Le peinaron los largos cabellos oscuros y los dispusieron sobre los hombros. El cinturón dorado de Lórien le brillaba en la cintura. Junto a él colocaron el yelmo y sobre el regazo el cuerno hendido y la empuñadura y los fragmentos de la espada, y a sus pies las armas de los enemigos"...” y luego fue lanzada a las corrientes del Anduin. "(...)"El río se había llevado a Boromir hijo de Denethor y ya nadie volvería a verlo en Minas Tirith, de pie en la Torre Blanca por la mañana como era su costumbre"..." Los tres compañeros se quedaron un rato a observarlo mientras la barca se alejaba y caía por el Rauros; y de pronto Aragorn y Legolas cantaron unas bellas canciones de despedida. Unos días después, en una noche, Faramir vio, como en una ensoñación, un extraño bote venir por el río, con un guerrero semisumergido en el agua. Al acercarse vio que se trataba de su hermano. Recuperó tan solo el cuerno y se lo llevó a su padre. Se dijo que su cuerpo siguió por el río hasta llegar al Mar, que fue su morada definitiva.


title: Boromir

text: Tanto en la película de animación dirigida por Ralph Bakshi en 1978 como en el serial radiofónico emitido por la BBC en 1981, la voz de Boromir fue interpretada por Michael Graham Cox. En la película de Bakshi, Boromir fue dibujado con un aspecto de bárbaro o vikingo, incluso con dos afilados cuernos en el casco, que nada tiene que ver con el texto de Tolkien.


title: Boromir

text: En la trilogía de Peter Jackson, el actor Sean Bean interpreta el personaje de Boromir. En contra de la distribución dada por Tolkien a los hechos de la novela, la muerte de Boromir se muestra al final de "", en vez de al principio de "", pues los guionistas decidieron usar esta escena como desenlace de la primera película. Esta decisión implicó que el papel de Sean Bean se limitara casi en exclusiva a "El Señor de los Anillos: la Comunidad del Anillo", apareciendo en las otras dos únicamente en diversos "flashbacks", que consiguen, sin embargo, que el actor amerite su presentación en los créditos de las tres películas:


title: Boromir

text: Otra diferencia argumental relacionada con Boromir es la representación de su muerte: mientras que en la novela se narra como es acribillado por flechas lanzadas por anónimos uruks liderados por Uglúk, en la película los guionistas decidieron dar un papel más relevante a Lurtz, un personaje uruk inventado por ellos, siendo este el que mata a Boromir con su arco.


title: Boromir

text: En cuanto al aspecto físico del personaje y su caracterización, Sean Bean tiene el pelo claro, mientras que Tolkien describe a Boromir con el pelo moreno. Además, en la novela, Boromir utiliza una espada larga y una daga, y no usa cota de malla, o al menos no se especifica; mientras que Sean Bean sí la viste en la película, y emplea una espada ancha. La diferencia de edad (o más bien de aspecto, teniendo en cuenta la raza longeva de la que proviene) es bastante notable.


title: Boromir

text: En las películas de Peter Jackson, Sean Bean fue doblado por los actores de voz Jordi Boixaderas para España y Salvador Delgado para Hispanoamérica.


title: Candomblé

text: El candomblé, culto de los orishas, de origen totémico y familiar, es una de las religiones afrobrasileñas practicadas principalmente en Brasil, aunque ha llegado a los países vecinos como: Argentina, Paraguay, Uruguay, Venezuela y hasta México.


title: Candomblé

text: La religión tiene por base al "ánima" (alma) o espíritu de la naturaleza y por tanto es clasificada como animista. Se presume que sacerdotes animistas que fueron esclavizados y transportados al Brasil y a colonias españolas trasmitieron sus creencias y cultura a otros esclavos, los que eventualmente escaparon y formaron asentamientos de cimarrones, llamados también quilombos junto a sus orixás/nkisis/voduns, su cultura y sus dialectos entre 1549 y 1888.


title: Candomblé

text: Pese a estar confinado originalmente a reductos y asentamientos de cimarrones, prohibido por la Iglesia católica y hasta criminalizado por algunos gobiernos, el candomblé prosperó durante cuatro siglos y se expandió notablemente después de la Ley Áurea en territorios del Imperio de Brasil.  Hoy es una de las principales religiones establecidas, con seguidores de todas las clases sociales y decenas de miles de templos (llamados terreiros). En censos recientes aproximadamente 3 millones de brasileños (1,5% de las población total) declararon al candomblé como su religión. En Salvador de Bahía existen 2230 terreiros registrados en la Federación Baiana de Cultos Afrobrasileños. Además, en la cultura brasileña las religiones no se ven como exclusivas y según algunas organizaciones culturales afrobrasileñas hasta 70 millones de personas participan en rituales del candomblé, regular u ocasionalmente. Los Orixás del candomblé, hoy los rituales y las fiestas son parte de la cultura y el folclore brasileños.


title: Candomblé

text: El candomblé no debe ser confundido con Umbanda o Batuque, otras dos religiones afrobrasileñas de similar origen, ni con otras religiones afroderivadas como el vudú haitiano, la santería cubana o el Palo Mayombe, las cuales surgieron independientemente del candomblé y son virtualmente desconocidas en Brasil.


title: Candomblé

text: Los esclavos afrobrasileños pertenecían a diversos grupos étnicos como los yoruba, los ewe, los fon y los bantú. Como la religión se volvió semi-independiente en regiones diferentes del país y entre grupos étnicos diferentes, “divisiones” o naciones surgieron distinguidas entre sí principalmente por el conjunto de divinidades veneradas, el atabaque (música) y la lengua sagrada, usada en los rituales.


title: Candomblé

text: La siguiente es una clasificación poco rigurosa de las principales naciones y subnaciones, de sus religiones de origen, y de sus lenguas sagradas: Todas estas tribus eran pueblos jeje y tenían por lengua sagrada la lengua ewe y la lengua fon. Otros grupos jeje son jeje mina, el Tambor de Mina (en San Luis del Maranhão) y babacué (en Pará).


title: Candomblé

text: El candomblé es una religión henoteísta, el dios principal para la nación ketú es Olorum, para la nación bantú es Zambi y para la nación jeje es Mawu. Son naciones independientes en la práctica diaria y, en virtud del sincretismo existente en Brasil, la mayoría de los participantes consideran al dios principal de su panteón como equivalente al Dios de la Iglesia católica.


title: Candomblé

text: Los Orixás/Inquices/Voduns reciben homenajes regulares con ofrendas, cánticos, danzas y vestimenta especial. Así, cuando hay referencia mitológica a una divinidad creadora, esa divinidad tiene tanta importancia en el día a día de los miembros del terreiro, como es el caso del Dios Cristiano, que la mayoría de las veces son confundidos con dioses.


title: Candomblé

text: El candomblé rinde culto, entre todas las naciones, a cincuenta de las centenas de deidades antes adoradas en África. Sin embargo, en la mayoría de los terreiros de las grandes ciudades, son dieciséis las más adoradas. Lo que sucede es que algunas divindades tienen "cualidades", que pueden ser adoradas como un diferente Orixá/Inquice/Vodun en uno u otro terreiro.


title: Candomblé

text: Entonces, la lista de divinidades de las diferentes naciones es grande, y muchos Orixás de ketu pueden ser "identificados" como los Voduns de los jejé o Inquices de los bantú en sus características, pero en la realidad no son los mismos: sus cultos, rituales y toques son totalmente diferentes. Los Orixás tienen personalidades, habilidades, preferencias y rituales individuales, y están ligados a un fenómeno natural específico (un concepto no muy diferente al Kami del sintoísmo). Toda persona es escogida al nacer por uno o varios "patronos" Orixá, que un babalorixá identificará. Algunos Orixás son "incorporados" por personas iniciadas durante rituales del candomblé; otros —como los llamados Funfun (blancos), que tomaron parte en la creación del mundo— no.


title: Candomblé

text: En el tiempo de las senzalas, los negros para poder rendir culto a sus Orixás, Inquices y Voduns usaban como camuflaje altares con imágenes de santos católicos, aunque según algunos investigadores este sincretismo ya había comenzado en África, inducido por los propios misioneros para facilitar la conversión. Después de la liberación de los esclavos comenzaron a surgir las primeras casas de candomblé y para entonces la religión había incorporados muchos elementos del catolicismo, crucifijos e imágenes eran exhibidos en los templos y Orixás eran frecuentemente identificados con santos católicos. Algunas casas de candomblé también incorporaron entidades caboclos que eran consideradas paganas, como los Orixás. Pero al usar imágenes y crucifijos, surgieron persecuciones por parte de las autoridades y por la Iglesia, que veían al candomblé como paganismo y  brujería. En los últimos años, ha crecido un movimiento "fundamentalista" en algunas casas de candomblé que rechazan el sincretismo con elementos cristianos y procuran recrear un candomblé "más puro" basado exclusivamente en elementos africanos.


title: Candomblé

text: Los templos de candomblé son llamados casas, roças o terreiros. Las casas pueden ser de linaje matriarcal, patriarcal o mixto:


title: Candomblé

text: La progresión en la jerarquía depende del aprendiz y su desempeño en los largos rituales de la iniciación. En caso de muerte de una iyalorixá, la sucesora es escogida, generalmente entre sus hijas, por medio del juego de adivinación Opele-Ifa o juego de búzios. Si la sucesión es muy disputada o no se encuentra un sucesor, esto conduce frecuentemente al cierre de la casa. Es por esto que en Brasil hay solo 3 o 4 casas que rondan los 100 años.


title: Candomblé

text: En las religiones afrobrasileñas el sacerdocio se divide en:


title: Candomblé

text: Manuel Raimundo Querino, un abolicionista persistente, luchó contra las persecuciones de los practicantes de religiones afrobrasileñas, las cuales fueron rotuladas como religiones bárbaras y paganas.


title: Candomblé

text: Procópio Xavier de Sousa, también conocido como Procópio de Ogum, obtuvo su reconocimiento a través de la participación en la legitimidad de la religión de "candomblé", durante las persecuciones a las Religiones Afrobrasileñas promovidas por las autoridades del Estado Novo. En ese período el "Ilê Ogunjá" fue invadido por la policía de Bahía, con la supervisión del famoso delegado "Pedrito Gordo". Procópio fue detenido y golpeado. El periodista "Antônio Monteiro" fue una de las personas que ayudaron en la liberación de Procópio. Con este evento, "caso Pedrito" fue registrado el nombre de Procópio en la historia popular de la Bahía incluso como parte de una letra musical de Samba de Roda:


title: Candomblé

text: "Procópio tava na sala, esperando santo chegá, quando chegou seu Pedrito, Procópio passa pra cá. Galinha tem força n'asa, o galo no esporão, Procópio no candomblé Pedrito no facão" (samba de roda, autor desconocido)


title: Candomblé

text: La intolerancia y la persecución a las religiones afrobrasileñas continúa hasta el día de hoy. La libertad religiosa en la Constitución Brasileña no siempre se respeta.Abdias do Nascimento hablando en una entrevista concedida al Portal Afro dijo: "Los cultos Afrobrasileños son un asunto para la policía. Hasta el momento, en los museos de la policía de Río de Janeiro y de Bahia, pueden encontrarse artefactos culturales secuestrados. Son piezas que demuestran la supuesta delincuencia o anormalidad mental de la comunidad negra. En Bahia, el Instituto Médico Legal Nina Rodrigues, el Instituto Nina Rodrigues muestra exactamente esto: que el negro era un camarada con un desequilibrio en la cabeza a tener sus propias creencias, sus valores, su liturgia y su culto. No podían aceptar esto."


title: Candomblé

text: La homosexualidad está presente en la mayoría de las religiones, pero oculta, y sin duda encubierta y a menudo negada por los propios homosexuales.


title: Candomblé

text: En el candomblé la homosexualidad es discutida ampliamente y aceptada hoy en día, pero hubo un periodo en que los varones homosexuales no podían ser iniciados como rodantes (término utilizado para las personas que entran en trance), no se permitía que un hombre danzase la rueda de candomblé, incluso aunque estuviese en trance.


title: Candomblé

text: El más famoso y revolucionario gay del candomblé fue, sin duda, Joãozinho de Goméia, que afrontó la oposición de las matriarcas y ocupó su espacio por el cual se le conoce internacionalmente. Había muchos otros, pero ninguno logró igualarlo en audacia y popularidad.


title: Candomblé

text: En las religiones afrobrasileñas que en la mayoría de las religiones se derivan de las religiones tribales de África, están contra el aborto y una de las razones es la religiosa. Los africanos ven a su hijo como la continuación de su vida, el hijo es la cosa más preciosa que el hombre africano puede tener. Como resultado, fueron llevados a Brasil algunos conceptos.


title: Roger & Me

text: Roger & Me es una película documental, escrita y dirigida por el cineasta estadounidense Michael Moore.