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abstract
In der vorliegenden Arbeit sollte die Bedeutung von Stickstoffmonoxid ( NO ) fuer den ischaemiebedingten neuronalen Zelltod beim Feten unabhaengig vom Herz-Kreislauf-System untersucht werden . Hierzu verwendeten wir ein hippokampales Gewebeschnittmodell . Als Marker fuer den neuronalen Zellschaden waehlten wir die postischaemische Beeintraechtigung des Energiestoffwechsels und der Proteinbiosynthese . Methode : Reife Meerschweinchenfeten wurden mit Halothan narkotisiert . Das Hippokampusareal des Gehirns wurde entnommen und in 500 µm dicke Scheiben geschnitten . Die Gewebescheiben wurden in artifizielle Liquorfluessigkeit ( aCSF ) transferiert und mit O2/CO2 ( 95%/5% ) in einer Inkubationskammer begast . Zur Induktion der Ischaemie in vitro wurden die Gewebescheiben in einen glukosefreien aCSF transferiert und fuer 10 - 40 min mit N2/CO2 ( 95%/5% ) begast . Bei einem Teil der Gewebeschnitte wurde die NO-Synthase mit 100 µM N-Nitro-L-Arginin ( NNLA ) geblockt . Die Aktivierung der NO-Synthase waehrend der Ischaemie wurde ueber die Gewebekonzentration von cGMP bestimmt . cGMP wurde mit einem Radioimmunoassay gemessen 12 ; h nach Ischaemie in vitro wurden die Adenylate und die Proteinbiosyntheses in den Gewebescheiben bestimmt . Die Konzentration der Adenylate wurde mit HPLC nach Extraktion mit Perchloressigsaeure gemessen . Die Proteinbiosynthese wurde als Inkorporationsrate von L- [ 1-14C] Leucin in Gewebeproteine ermittelt . Unterschiede innerhalb und zwischen den Gruppen wurden mit einer zweifaktoriellen Varianzanalyse und Scheffé-post-hoc-Test auf Signifikanz ( p 0.05 ) geprueft . Ergebnisse : Waehrend einer 40minuetigen Ischaemie in vitro stieg die Konzentration von cGMP in den Gewebescheiben signifikant an ( Kontrolle ; 1,35 +/- 0,38 pmol/mg Protein vs. I 40 : 18,6 +/- 1,04 pmol/mg Protein : p 0.05 ) . Der cGMP-Anstieg waehrend der Ischaemie konnte durch NNLA nahezu vollstaendig inhibiert werden . Allerdings gelang es nicht durch NNLA den Energiestoffwechsel oder die Proteinbiosynthese 12 h nach 40minue-tiger Ischaemie in vitro zu verbessern . Schlussfolgerung : Die NO-Synthase wird waehrend einer Ischaemie im fetalen Gehirn erheblich aktiviert . Stickstoffmonoxid scheint dabei unabhaengig von seinen Wirkungen auf das Herz-Kreislauf-System fuer die Genese des neuronalen Zelltodes nach einer transienten Ischaemie im unreifen Gehirn keine groessere Bedeutung zu haben .
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